巴氏阿米巴原虫染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于检测巴氏阿米巴原虫（Entamoeba histolytica）的核酸，适用于科研领域的定性和定量分析。试剂盒包含优化的引物、荧光染料及阳性对照，具有高灵敏度和特异性，可有效避免与其他微生物DNA的交叉反应。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物基于巴氏阿米巴原虫高度保守区设计，确保检测准确性。

双功能检测：支持定性和定量分析，定量线性范围达5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

安全设计：提供无传染性的DNA片段作为阳性对照，避免活体病原污染风险。

稳定保存：-20℃保存，避免反复冻融。

组分与规格

反应次数：50次（20μL体系/次）。

核心组分：预混PCR Master Mix（含荧光染料）、引物、阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）、模板稀释液。

荧光参数：染料游离态吸收峰471 nm，结合DNA后吸收峰500 nm，发射峰530 nm。

操作步骤

标准曲线制备（以10²~10⁷拷贝/μL为例）

标记稀释管：标记6管为2~7号，每管加入45 μL模板稀释液。

梯度稀释：取5 μL阳性对照加入7号管（终浓度10⁷拷贝/μL），混匀后依次10倍稀释至2号管（10²拷贝/μL）。

注意事项：操作需在独立区域进行，避免交叉污染。

PCR扩增与数据分析

数据采集：按仪器推荐程序设置（信号采集建议在复性/延伸阶段）。

定量分析：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算待测样本浓度。

定性判读：

阳性：Ct≤35，且扩增曲线典型。

阴性：Ct≥40。

可疑：35<Ct<40需复测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

安全防护：操作时需穿戴实验服、手套及口罩。

质量控制：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30方为有效。

保存与运输

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤3次）。

有效期：12个月。

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