小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

产品特点

灵敏度高：最小检出量为27.8 pg/mL。

特异性强：与小鼠MIP-1β、RANTES、MIP-1α及人TARC、MCP-1、MCP-2等无交叉反应。

重复性好：板内和板间变异系数均小于10%。

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。捕获抗体预先包被在微孔中，依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体，经过温育和洗涤后，加入底物TMB显色，用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），从而计算样品中的TARC/CCL17浓度。

实验步骤

编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔。

加样：分别加入阴性对照、阳性对照和待测样品。

温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

加酶：每孔加入酶标试剂50 μL，空白孔除外。

显色：每孔先加入显色剂A 50 μL，再加入显色剂B 50 μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

终止：每孔加终止液50 μL，终止反应。

测定：以空白空调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。

样本处理

血清：全血标本室温放置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清。

血浆：用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清。

保存条件

标准品：4℃保存1-2周，-20℃保存6个月内有效。

试剂盒其他组分：4℃保存6个月内有效，严禁冻存。

注意事项

安全操作：避免人体直接接触显色剂A、B和终止液，实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。

仪器预热：酶标仪使用前需预热30分钟。

避免交叉污染：每个样品或标准品需更换枪头。

该试剂盒适用于科研实验，不得用于临床诊断。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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