鄂木斯克出血热病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

用于定性或定量检测鄂木斯克出血热病毒RNA，适用于科研用途，不适用于临床诊断。

产品特点

高灵敏性：引物针对OHFV高度保守区设计，检测限低至10^2拷贝/μL。

特异性强：与其他出血热病毒（如克里米亚-刚果出血热病毒）无交叉反应。

操作简便：预混反应体系，用户仅需提供RNA模板。

兼容性广：适配多数商业核酸提取试剂盒提取的RNA样本。

定量功能：标准曲线线性范围覆盖5个数量级（10^2~10^7拷贝/μL）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格（50次） | 保存条件 |

| qRT-PCR预混液（染料法） | 500 μL | -20℃避光 |

| RT-PCR酶混合液 | 100 μL | -20℃避光 |

| 阳性对照（OHFV RNA） | 50 μL | -80℃（避免反复冻融） |

| DEPC-H2O | 1 mL | 室温 |

实验步骤

1. RNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒从血清、组织等样本中提取RNA，建议使用DNase处理以去除基因组DNA污染。

2. 反应体系配制（样本制备区）

每20μL反应体系：

预混液 10 μL

酶混合液 2 μL

RNA模板 5 μL

DEPC-H2O 补至20 μL

3. 标准曲线制备（独立区域操作）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），用于生成标准曲线。

4. PCR程序设置

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 2分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（荧光采集）

结果判读

定性检测：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

定量检测：根据标准曲线计算样本病毒载量。

注意事项

避免试剂反复冻融，开封后需分装保存。

实验分区操作（样本制备区、扩增区），防止气溶胶污染。

废弃物的处理需符合生物安全规范。

保存与运输

保存温度：-20℃避光（有效期12个月）。

运输条件：干冰或冰袋低温运输。

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