小鼠调节激活正常T-细胞表达分泌因子(RANTES)ELISA试剂盒 新品

小鼠调节激活正常T-细胞表达分泌因子(RANTES)ELISA试剂盒

产品简介:

工作原理

该试剂盒基于经典的酶联夹心法技术。预先包被的抗体为多克隆抗体，检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素标记。样品和生物素标记抗体加入酶标板孔反应后，经洗涤，加入过氧化物酶标记的亲和素反应；再经洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

试剂盒组成

标准品：用于建立标准曲线，确定样品中RANTES的浓度。

预包被抗体的96孔板：已包被针对RANTES的抗体，用于捕获样本中的RANTES蛋白。

生物素标记抗体：与捕获抗体互补，用于检测结合的RANTES蛋白。

亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）：与生物素标记抗体结合，催化底物显色。

洗涤液：用于洗涤反应板，去除未结合的物质。

底物溶液：TMB显色液，与酶反应产生颜色变化。

终止液：终止底物反应，稳定颜色，便于读数。

检测样本类型

适用于血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆液、体液等多种样本类型。

操作步骤

准备试剂和样本：按说明书准备试剂，样本需适当稀释。

加样：将标准品和样本加入酶标板孔，37℃孵育。

洗涤：去除未结合物质。

加检测抗体：加入生物素标记抗体，37℃孵育。

再次洗涤：去除未结合的抗体。

加酶标抗体：加入亲和素-过氧化物酶复合物，37℃孵育。

第三次洗涤：去除未结合的酶标抗体。

显色：加入底物溶液，避光孵育，观察颜色变化。

终止反应：加入终止液，终止显色反应。

读数：使用酶标仪在特定波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中RANTES的浓度。

注意事项

试剂盒保存：未使用的试剂盒应按照说明书保存，避免反复冻融。

操作规范：严格按说明书操作，避免交叉污染，使用一次性吸头和试管。

样本处理：样本应避免反复冻融，长期保存需分装冷冻。

仪器校准：酶标仪和洗板机需定期校准，确保结果准确。

试剂盒优势

高灵敏度和特异性：采用高效的抗体，能够准确检测低浓度的RANTES。

稳定性和重复性：试剂盒组分稳定，实验结果可靠。

适用性广：适用于多种样本类型，满足不同实验需求。

如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

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注意事项

科研用途：仅供科研实验使用，不可用于临床诊断。

操作规范：严格按照说明书操作，避免交叉污染，确保实验结果准确。