人免疫缺陷病毒II型B组前病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

人免疫缺陷病毒II型B组前病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒采用实时荧光定量PCR技术（qPCR） 和DNA结合染料法，用于体外定量检测人全血、外周血单个核细胞（PBMC）或其他含细胞样本中提取的基因组DNA中的人免疫缺陷病毒II型（HIV-2）B组前病毒DNA的拷贝数。

目标：HIV-2 B组前病毒DNA的保守区域（通常设计在 gag 或 LTR 基因）。

应用场景：

科研领域：研究HIV-2 B组感染的病毒储存库动力学、潜伏机制、治疗效果评估等。

临床监测：在特定需求下（如评估抗病毒治疗效果、潜伏感染程度），辅助监测感染者体内含HIV-2 B组前病毒的细胞数量（需结合临床其他指标）。

不用于：HIV-2感染的初筛诊断或确诊。初筛和确诊应使用经批准的抗体/抗原检测和/或HIV-2 RNA病毒载量检测。

检测原理

样本处理：从人抗凝全血或分离的PBMC中提取基因组DNA（含宿主DNA和可能存在的HIV-2前病毒DNA）。

PCR扩增与荧光检测：

反应体系中包含特异性引物对（针对HIV-2 B组前病毒DNA保守区）和能结合双链DNA的荧光染料（如SYBR Green I, EvaGreen等）。

在荧光定量PCR仪中进行热循环扩增。引物介导目标HIV-2前病毒DNA片段的特异性扩增。

荧光染料在游离状态下荧光微弱，当特异性地掺入新合成的双链DNA产物时，荧光信号显著增强。

仪器实时监测每个循环结束时的荧光强度。荧光信号强度与反应体系中双链DNA产物的量成正比。

定量分析：

通过检测荧光信号超过背景阈值（Threshold）的循环数（Ct值/Cq值）来定量。

试剂盒提供已知浓度的标准品（通常是含有目标序列的重组质粒DNA或人工合成DNA片段），制作标准曲线（Ct值 vs Log10 拷贝数）。

将待测样本的Ct值与标准曲线比对，即可计算出样本中HIV-2 B组前病毒DNA的拷贝数。通常结果表示为“拷贝数/百万细胞”或“拷贝数/μg DNA”，需通过内参基因（如β-Actin, GAPDH, RNase P等）对细胞数量或DNA量进行归一化处理。

自备材料与设备

用于样本处理的设备：离心机、涡旋振荡器、移液器及无菌带滤芯吸头。

样本来源：人抗凝全血（推荐EDTA抗凝）或外周血单个核细胞（PBMC）。

基因组DNA提取试剂盒：适用于全血/PBMC的基因组DNA提取试剂盒（如Qiagen QIAamp DNA Blood Mini Kit, 天根生化血液基因组DNA提取试剂盒等）。

微量分光光度计或荧光计（如NanoDrop, Qubit）：用于定量提取的基因组DNA浓度和纯度。

无菌、无核酸酶的PCR反应管/板。

实时荧光定量PCR仪。

冰盒。

生物安全柜（推荐用于样本处理）。

个人防护装备（实验服、手套、护目镜等）。

样本采集与处理

采集：无菌采集人EDTA抗凝全血或分离PBMC。

DNA提取：

严格按照自备的基因组DNA提取试剂盒说明书进行操作。确保有效裂解细胞，释放基因组DNA（含前病毒DNA）。

用洗脱液（如Tris-EDTA Buffer）洗脱DNA。

定量与质检：用微量分光光度计（NanoDrop）或荧光定量法（Qubit dsDNA HS Assay）测量DNA浓度（ng/µL）和纯度（OD260/OD280 ≈1.8-2.0）。记录浓度。建议DNA浓度在20-100 ng/µL范围。

提取的DNA可短期储存于4℃（几天内），长期储存于-20℃或-80℃。避免反复冻融。

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