牛病毒性腹泻病毒1型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

牛病毒性腹泻病毒1型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于荧光定量PCR技术，针对牛病毒性腹泻病毒1型（BVDV-1）基因组高度保守区域设计特异性引物和探针，通过实时监测荧光信号实现病毒核酸的定性检测。适用于临床样本、动物组织或培养物中BVDV-1的快速筛查和定量分析。

检测原理

采用染料法（如TB Green Premix Ex Taq II），在PCR扩增过程中，染料与双链DNA结合释放荧光信号，通过荧光定量PCR仪实时监测扩增曲线，根据Ct值判定结果。

试剂盒组分

PCR预混液：包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。

引物与探针（示例序列）：

上游引物：5'-GCAGCACCCTATCAGGCTGT-3'

下游引物：由用户提供或参考相关标准（如DB51T 3015-2023）。

阳性对照：含BVDV-1靶序列的质粒或灭活病毒。

阴性对照：无核酸酶水。

DEPC处理水：用于反应体系补足。

操作步骤

样本处理：提取待测样本RNA，反转录为cDNA。

反应体系配制（20μL）：

预混液：10μL

上、下游引物：各1.0μL

cDNA模板：1.5μL

DEPC水：补至20μL

PCR程序：

预变性：95℃ 1分钟；

扩增：95℃ 15秒→51℃ 30秒，共40循环；

熔解曲线分析：95℃ 15秒→60℃ 1分钟→95℃ 15秒（可选）。

结果判定

阈值设定：以仪器噪声为基准，阈值线需超过阴性对照扩增曲线的最高点。

阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型；

阴性判定：无Ct值或Ct值＞40。

注意事项

试剂保存于-20℃，避免反复冻融。

操作需在无菌环境下进行，防止污染。

建议每批次实验设置阴阳性对照。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的病毒核酸。

特异性：引物经优化，不与BVDV-2或其他常见牛源病原体交叉反应。

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