小鼠肾足蛋白(NPHN)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

实验原理

试剂盒采用双抗体夹心法。将针对肾足蛋白的抗体包被在酶标板上，加入标准品或样本后，肾足蛋白与固相抗体结合。随后加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。加入底物TMB显色，颜色深浅与肾足蛋白浓度呈正相关，通过酶标仪测定吸光度（OD值）计算浓度。

产品组成

预包被酶标板：8×6条（48T）或8×12条（96T）。

标准品：1支（48T/96T）。

标准品/样品稀释液：10ml（48T）或15ml（96T）。

生物素化检测抗体：60μl（48T）或120μl（96T）。

生物素化检测抗体稀释液：6ml（48T）或12ml（96T）。

SABC复合物：6ml（48T）或12ml（96T）。

TMB显色液（A/B）：各3ml（48T）或各6ml（96T）。

终止液：6ml（48T）或12ml（96T）。

20×浓缩洗涤液：30ml（48T）或60ml（96T）。

封板胶纸：2张（48T）或4张（96T）。

说明书：1份。

性能参数

检测范围：0.312-20ng/mL。

灵敏度：最低检测限为0.134ng/mL。

特异性：可检测重组或天然肾足蛋白，与其他细胞因子无交叉反应。

重复性：板内和板间变异系数均小于10%。

操作步骤

加样：空白孔加50μl标准品/样品稀释液，其余孔加标准品或样本50μl，37℃反应40分钟。

洗板：用1×洗涤液充分洗涤4-6次。

加生物素化抗体：空白孔加100μl生物素化抗体稀释液，其余孔加1×生物素化抗体工作液100μl，37℃反应30分钟。

洗板：同上。

加SABC复合物：每孔加100μl SABC复合物工作液，37℃反应20分钟。

洗板：同上。

显色：每孔加TMB混合液100μl，37℃暗处反应10-20分钟。

终止：每孔加100μl终止液，混匀后30分钟内测OD值。

注意事项

样本处理：血清、血浆等样本需避免溶血，及时检测或冷冻保存，避免反复冻融。

试剂配置：洗涤液需按比例稀释，生物素化抗体和SABC复合物需当日配置。

操作规范：严格按步骤操作，避免交叉污染，确保实验准确性。

适用样本

适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其他生物体液。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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