小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE) ELISA试剂盒是一种用于定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等生物样本中NSE浓度的科研工具。该试剂盒基于双抗体夹心ELISA法原理，通过特异性抗体识别NSE蛋白，具有高灵敏度和高特异性，广泛应用于神经科学研究、疾病机制探索及药物开发等领域。

核心原理

采用双抗体夹心法：用抗小鼠NSE抗体包被酶标板，样本中的NSE与抗体结合后，加入生物素化检测抗体和HRP标记的亲和素，形成免疫复合物。

显色反应：加入TMB底物后产生蓝色反应，终止液使颜色变为黄色，颜色深浅与NSE浓度呈正相关。

浓度计算：在450 nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算样本中NSE的浓度。

主要参数

参数  说明

检测范围  通常为78.13–5000 pg/mL 或 0.5–16 ng/mL（依品牌而异）

灵敏度  最低可检测浓度达46.88 pg/mL

特异性  不与结构类似物发生交叉反应

重复性  板内和板间变异系数均小于10%–15%

样本类型  血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞上清、组织匀浆等

保存条件  2–8°C冷藏保存，未开封试剂盒建议分装后长期保存于-20°C

有效期  一般为6个月至11个月（见具体产品说明）

操作步骤概览

准备：试剂和样本恢复至室温（20–25°C），平衡15–30分钟；

加样：将标准品和待测样本加入预包被抗体的微孔中；

温育与洗涤：37°C孵育一定时间，洗板5次去除未结合物质；

加检测抗体：加入生物素化抗体，再次温育并洗涤；

显色：加入TMB底物，避光显色10–15分钟；

终止与读数：加入终止液后15分钟内于450 nm处测定OD值；

数据分析：绘制标准曲线，代入样本OD值计算浓度。

关键注意事项

不建议反复冻融样本，以防止蛋白降解；样本若需长期保存，建议分装后置于-20°C或更低温度；

不同批次试剂不可混用，避免交叉污染；

实验过程中需设置标准曲线和复孔，确保数据准确性；

试剂盒仅用于科研，不适用于临床诊断。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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