牛鼻炎病毒通用 染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用荧光定量RT-PCR技术，专用于牛鼻炎病毒（Bovine Rhinitis Virus, BRV）核酸的快速、高灵敏度检测。通过特异性引物和探针结合染料法荧光信号放大系统，可实现病毒RNA的准确定量分析，适用于临床样本、环境监测及科研用途。

检测原理

RNA提取与逆转录：样本中的病毒RNA经裂解释放后，通过逆转录酶合成cDNA。

荧光定量PCR：采用特异性引物和荧光染料（如SYBR Green）与双链DNA结合，实时监测扩增荧光信号，通过标准曲线计算病毒载量。

试剂盒组成

反应预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。

标准品：梯度稀释的阳性标准品（浓度范围1.5–24 μg/mL），用于建立定量曲线。

阴性/阳性对照：确保检测体系有效性。

RNA提取试剂：溶液A（裂解液）、溶液B（中和液）。

操作步骤

1. 样本制备

固体样本：取1–5 mg组织，加入100 μL溶液A，95℃裂解10分钟，冷却后加入10 μL溶液B混匀。

液体样本：取5 μL直接加入裂解液，震荡混匀。

2. RT-PCR反应体系（40 μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| 预混液 | 20 |

| 引物探针混合液| 5 |

| 模板cDNA | 5 |

| RNase-free水 | 10 |

3. 扩增程序

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

循环扩增（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）

结果判读

阈值设定：以扩增曲线指数期荧光信号超过背景阈值为阳性。

定量分析：根据标准品Ct值生成标准曲线，计算样本病毒载量。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免RNA降解。

建议每个样本设置复孔，模板用量差异10倍以验证重复性。

扩增结束后立即分析数据，避免荧光信号衰减。

性能参数

灵敏度：最低检测限为10 copies/μL。

特异性：与牛赤羽病病毒等常见病原体无交叉反应。

稳定性：试剂盒-20℃保存有效期12个月。

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