小鼠凝血酶/抗凝血酶复合体(TAT)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

产品原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附技术（ELISA）。预先包被抗小鼠TAT抗体的酶标板中加入标准品和样本，温育后加入生物素标记的抗TAT抗体，再与HRP标记的链霉亲和素结合，形成免疫复合物。经过洗涤去除未结合成分，加入显色底物TMB，产生蓝色，在酸作用下转为黄色。用酶标仪在450 nm波长处测定吸光度（OD值），样本中TAT浓度与OD值成正比，通过标准曲线计算得出。

产品特点

高灵敏度：检测浓度可低至10 pg/ml以下。

高特异性：不与结构类似的其他物质交叉反应。

重复性好：板内、板间变异系数均小于15%。

准确性高：标准品线性回归相关系数R值≥0.990。

产品组成（以96T为例）

预包被抗体的96孔板。

生物素标记抗体。

HRP标记的链霉亲和素或亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）。

标准品。

显色底物（TMB）。

终止液。

洗涤液。

适用样本

血清：室温下血液自然凝固后离心获取。

血浆：使用EDTA或柠檬酸钠抗凝，离心后收集。

细胞培养上清、组织匀浆等：离心去除沉淀后使用。

操作步骤

准备试剂和样本：按说明书准备试剂，处理样本。

加样：加入标准品和样本，37℃孵育。

洗涤：去除未结合成分。

加检测溶液：依次加入生物素标记抗体和HRP标记的链霉亲和素，孵育后洗涤。

显色：加入TMB底物，显色后加终止液。

测定：酶标仪测定OD值，计算样本中TAT浓度。

注意事项

样本处理：避免使用含的样品，因其抑制HRP活性。

试剂准备：严格按照说明书配制试剂，避免污染。

操作规范：使用移液器准确加样，避免交叉污染。

结果判定：以酶标仪读数为准，必要时做标准曲线。

存储条件

试剂盒储存在2-8℃，避免冻结和阳光直射。

标准品和样本应分装保存，避免反复冻融。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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