小鼠内脂素/内脏脂肪素(VF)ELISA试剂盒

产品介绍：

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将针对内脂素/内脏脂肪素的抗体包被在酶标板上，加入标准品或待测样本后，内脂素/内脏脂肪素与固相抗体结合。随后加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。加入底物TMB显色，颜色深浅与内脂素/内脏脂肪素浓度正相关，通过酶标仪测定吸光度（OD值）计算浓度。

试剂盒组成

预包被抗体的酶标板：8×6条（48T）或8×12条（96T）。

标准品：不同浓度的小鼠内脂素/内脏脂肪素标准品。

HRP标记的检测抗体：6ml（48T）或12ml（96T）。

洗涤液：20×浓缩液，需稀释后使用。

底物液（TMB）：6ml（48T）或12ml（96T）。

终止液：6ml（48T）或12ml（96T）。

其他：封板膜、说明书等。

检测范围与灵敏度

检测范围：0.312-20 ng/mL。

灵敏度：最低检测限为0.078 ng/mL。

适用样本

血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及相关生物液体。

操作步骤

样本处理：按规范收集并处理样本，避免溶血和反复冻融。

试剂准备：平衡试剂盒至室温，按需稀释试剂。

加样孵育：加入标准品和样本，温育后洗涤。

显色检测：依次加入检测抗体、底物液和终止液，测定OD值。

注意事项

试剂盒保存：2-8℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：一般为6个月。

安全防护：操作时佩戴手套，避免试剂接触皮肤。

产品特点

高灵敏度：可检测低浓度内脂素/内脏脂肪素，满足科研需求。

特异性强：不与结构类似物交叉反应。

重复性好：板内变异系数<10%，板间变异系数<15%。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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