小鼠免疫球蛋白G2α(IgG2a)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法。预先包被酶标板的特异性抗小鼠IgG2a抗体与样本中的IgG2a结合，洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。加入显色底物TMB后，酶催化底物显色，颜色深浅与IgG2a浓度成正比。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），并绘制标准曲线，计算样本中IgG2a的浓度。

试剂盒组成

酶标包被板：预包被抗小鼠IgG2a抗体的微孔板。

标准品：已知浓度的IgG2a标准品，用于绘制标准曲线。

检测抗体：生物素或辣根过氧化物酶标记的抗小鼠IgG2a抗体。

洗涤液：用于洗涤未结合物质。

显色剂：TMB显色底物，催化后显色。

终止液：终止显色反应，便于测定OD值。

操作步骤

加样：在酶标板孔中加入标准品或样本。

孵育：37℃孵育，使IgG2a与包被抗体结合。

洗涤：去除未结合的物质。

加检测抗体：加入酶标抗体，孵育后洗涤。

显色：加入显色剂，避光孵育，使颜色显色。

终止：加入终止液，终止显色反应。

测定：用酶标仪在450nm波长下测定OD值。

计算：通过标准曲线计算样本中IgG2a的浓度。

样本处理

血清：全血自然凝固后离心取上清。

血浆：使用EDTA或肝素抗凝，离心取上清。

组织匀浆：组织剪碎后，用PBS匀浆，离心取上清。

细胞培养上清：离心去除细胞碎片，取上清检测。

注意事项

试剂盒保存：2-8℃保存，避免反复冻融。

操作规范：严格按照说明书操作，避免交叉污染。

结果判定：以酶标仪读数为准，必要时设置复孔以提高准确性。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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