牛分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

产品用途

本试剂盒用于快速检测 牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis） 的DNA，适用于临床样本（如牛奶、组织）、环境样本或培养物的特异性检测，兼容常见荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。

检测原理

染料法：采用SYBR Green I荧光染料，特异性结合双链DNA产物，通过实时荧光信号监测扩增过程。

特异性引物：针对牛分枝杆菌保守基因序列（如IS6110或mpb70基因）设计引物，确保高特异性。

试剂盒组成

| 组分 | 体积/数量 | 说明 |

| qPCR预混液（2×） | 1 mL×N | 含DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺ |

| 阳性对照（M. bovis DNA） | 50 μL | 已知浓度标准品 |

| 阴性对照（无核酸水） | 1 mL | 无DNA/RNA酶污染水 |

| 引物混合液（10×） | 100 μL | 特异性引物对 |

实验步骤

1. 样本DNA提取

建议使用商用细菌DNA提取试剂盒（。

2. PCR反应体系配制（20 μL体系）

| 组分 | 体积 |

| 2× qPCR预混液 | 10 μL |

| 10× 引物混合液 | 2 μL |

| 模板DNA | 2-5 μL |

| 无核酸水 | 补足至20 μL |

3. qPCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 | 否 |

| | 60℃ | 30 sec | 40 | 是 |

| 熔解曲线 | 65℃→95℃ | 0.5℃/step | 1 | 是 |

结果分析

阳性判定：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰值（Tm值符合预期）。

阴性判定：无Ct值或Ct值>40，熔解曲线无特异性峰。

注意事项：建议设置重复孔，排除操作误差。

性能参数

灵敏度：≤10拷贝/反应

特异性：不与结核分枝杆菌（M. tuberculosis）等其他常见分枝杆菌交叉反应。

线性范围：10²~10⁸ 拷贝/μL（R²≥0.99）。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免污染。

熔解曲线分析可区分非特异性扩增。

本试剂盒仅限科研使用，临床诊断需经当地法规批准。

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