堪萨斯分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

性能参数

灵敏度：100拷贝/反应（线性范围10¹–10⁶拷贝/μL，参考同类分枝杆菌试剂盒数据）

特异性：与结核分枝杆菌、牛分枝杆菌等无交叉反应

重复性：批内CV<3%，批间CV<5%（n=8次重复实验）

反应时间：全程约2.5小时（含样本前处理1小时）

试剂盒组成

（50次/盒）

组分 规格 用途

2×SYBR Green qPCR Mix 500μL 含热启动DNA聚合酶、dNTP、染料

麻风分枝杆菌引物混合液 100μL (10μM) 扩增靶基因保守区

阳性对照（质粒DNA） 50μL (1×10⁸ copies/μL) 验证反应有效性（无传染性片段）

核酸释放剂（试用装） 1mL 快速裂解病毒释放DNA

关键操作要点

样本采集与保存：

皮肤活检组织需液氮速冻后-80℃保存，避免反复冻融导致DNA降解；

鼻黏膜分泌物采集后立即放入含RNA酶抑制剂的保存液，4℃运输不超过24小时。

反应体系与程序：

20μL体系：2×SYBR Green Mix 10μL + 引物混合液2μL + 模板DNA 5μL + 无酶水3μL；

扩增程序：95℃预变性10分钟 → 40循环（95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟，采集荧光）→ 溶解曲线分析（65℃→95℃，每0.5℃停留5秒）。

结果判读标准：

阳性：Ct≤35且溶解曲线单一峰值（Tm=83±1℃）；

可疑：35<Ct<38，需用柱提法重新提取DNA验证；

阴性：Ct≥38或无扩增（需同时满足阴性对照无Ct值）。

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品RNA模板，无需额外优化反应体系。

高灵敏性：引物和探针经优化设计，检测灵敏度高，可精准识别低拷贝数目标序列。

内控设计：提供阳性对照，有效区分假阴性结果，确保检测可靠性。

特异性强：基于堪萨斯分枝杆菌高度保守区设计引物，避免与其他病毒或微生物RNA交叉反应。

高效稳定：50次反应体系兼容标准荧光定量PCR仪，结果重复性好。

操作流程

样本处理：提取待测样本RNA，建议使用无RNase环境操作。

反应配制：按20μL体系混合试剂盒组分（含2×预混液、引物探针、稀释液等），加入模板RNA。

PCR扩增：按以下程序运行：

逆转录：50℃ 10分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增循环（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

结果分析：通过阈值循环数（Ct值）判定样本阳性或定量分析。

注意事项

储存与运输：避免反复冻融，开封后需分装保存。

实验规范：操作需在无菌环境下进行，防止污染；废弃物料需灭菌处理。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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