念珠菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

念珠菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I染料法，专为念珠菌属（Candida spp.）核酸的高灵敏度、高特异性荧光定量PCR检测设计。适用于临床样本、环境样本或科研中念珠菌的定性和定量分析，检测线性范围覆盖10^2-10^7拷贝/μL，兼容常见荧光定量PCR仪。

试剂盒组分

2×荧光PCR预混液：含优化缓冲体系、dNTPs及热启动DNA聚合酶。

阳性对照：冻干DNA片段（非活体样本，避免生物污染），浓度1×10^8拷贝/μL。

阴性对照：无核酸酶水。

模板稀释液：用于标准品梯度稀释。

操作步骤

1. 标准品制备

标记6管，分别加入45 μL稀释液，依次梯度稀释阳性对照（10^7-10^2拷贝/μL），每步更换枪头，冰上保存。

注意：稀释需在独立洁净区操作，避免交叉污染。

2. PCR反应体系（20 μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 无核酸酶水 | 6 |

3. 扩增程序

预变性：95℃ 5分钟；

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）；

熔解曲线分析：60-95℃（验证扩增特异性）。

性能参数

灵敏度：最低检测限10^2拷贝/μL。

特异性：针对念珠菌属保守序列设计，不与常见病原体交叉反应。

重复性：CV值<5%（高、中、低浓度模板）。

注意事项

实验需分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。

熔解曲线出现多峰需排查污染或引物二聚体。

本产品仅限科研使用，临床诊断需经额外验证。

储存与有效期

-20℃避光保存，有效期12个月；避免反复冻融。

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