克柔念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

克柔念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I染料法荧光定量PCR技术，专用于克柔念珠菌（Candida krusei）的快速、高灵敏检测。适用于临床样本、环境样本或科研中核酸的定性及定量分析，具有全仪器平台兼容性、高特异性和重复性。

检测原理

通过优化设计的克柔念珠菌特异性引物扩增靶标DNA，SYBR Green I染料嵌入双链DNA后释放荧光信号，实时监测扩增曲线，结合标准品实现精确定量。

组分列表

2×荧光PCR预混液：含热启动DNA聚合酶、dNTPs及缓冲体系。

阳性对照：克柔念珠菌特异性DNA片段（10^8拷贝/μL），需按说明书稀释后使用。

阴性对照：无核酸酶水。

模板稀释液：用于标准品梯度制备。

操作步骤

1. 标准品稀释（示例：6个10倍梯度）

标记离心管：编号7至2，分别加入45 μL模板稀释液。

梯度稀释：

7号管：加入5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL），震荡混匀，得到10^7拷贝/μL标准品。

依次转移5 μL至下一管，最终获得10^2-10^7拷贝/μL系列浓度。

保存：稀释后标准品需置于冰上备用，避免反复冻融。

2. PCR反应体系配制

推荐体系（20 μL）：

2×预混液：10 μL

引物混合液：2 μL

模板DNA：2 μL

无核酸酶水：补至20 μL。

3. 扩增程序

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶标DNA。

特异性：不与近平滑念珠菌、白色念珠菌等常见病原体交叉反应。

线性范围：10^2-10^7拷贝/μL（R²≥0.99）。

注意事项

操作需在独立洁净区域进行，避免气溶胶污染。

阳性对照为非活体DNA片段，无需生物安全防护。

熔解曲线需呈现单一峰形，否则提示非特异性扩增。

储存与有效期

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月。

应用范围

适用于科研、临床诊断及环境监测，不可用于治疗决策。

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