热带念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

热带念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品用途

用于快速、高灵敏检测热带念珠菌（Candida tropicalis）的核酸，适用于临床样本、环境样本或科研中的定性与定量分析。

技术原理

染料法检测：采用SYBR Green I荧光染料，与双链DNA结合后发射荧光信号，通过实时监测扩增曲线实现定量。

高特异性：优化引物设计避免与其他念珠菌种（如近平滑念珠菌）或微生物发生交叉反应。

灵敏度：检测下限可达0.1 pg（高表达靶标）或单拷贝（DNA样本）。

试剂盒组分

主反应混合液：预混2×荧光PCR缓冲液（含Mg²⁺、dNTPs及稳定剂）。

热启动DNA聚合酶：耐高温酶确保扩增特异性。

阳性对照：非活体DNA片段（10^8拷贝/μL），需按梯度稀释使用。

阴性对照：无核酸酶水。

专用稀释液：用于标准品梯度制备。

操作步骤

1. 样本准备

提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

2. 阳性对照稀释（示例）

标记离心管（7-2号），依次加入45 μL稀释液。

7号管加入5 μL原液（10^8拷贝/μL），震荡混匀得10^7拷贝/μL，冰上保存。

同法逐级稀释至10^2拷贝/μL（6个梯度）。

3. PCR反应体系（20 μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×主反应混合液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA/对照 | 2 |

| 无核酸酶水 | 补至20 |

4. 扩增程序

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60℃~95℃（0.5℃/秒）

注意事项

分区操作：阳性对照稀释需在独立区域完成，避免气溶胶污染。

稳定性：预混液4℃保存不超过24小时，长期储存需-20℃避光。

假阴性判断：需同时运行阳性对照与阴性对照以验证结果有效性。

性能参数

线性范围：10^2~10^7拷贝/μL（R²≥0.99）。

重复性：CV值＜5%（高浓度样本）。

适用仪器：兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。

储存与运输

温度：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月（见包装标注）。

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