牛纽布病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

牛纽布病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测牛纽布病毒核酸，具有高灵敏度、高特异性和操作简便等特点。试剂盒包含所有必要的反应组分，用户只需提供待测样品即可进行检测。

检测原理

本试剂盒基于荧光定量PCR技术，利用特异性引物扩增牛纽布病毒靶序列，同时通过荧光染料实时监测扩增产物。荧光信号强度与PCR产物量成正比，通过标准曲线可实现病毒核酸的定量分析。

试剂盒组成

反应预混液（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等）

荧光染料

引物混合液

标准品（5个浓度梯度）

阳性对照

阴性对照

样品稀释液

DNA释放液（溶液A和溶液B）

自备仪器和耗材

仪器：分析天平、离心机、荧光PCR扩增仪、组织研磨器、-20℃冰箱

可调移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL）

耗材：荧光PCR反应管、灭菌离心管、吸头（10μL、200μL、1000μL）

样品制备

在标记好的离心管中加入1-5mg固体样品或5μL液体样品

加入100μL溶液A工作液，确保样品完全浸没

95℃保温10分钟

冷却至室温后加入10μL溶液B，混匀得DNA释放液

标准品稀释

本试剂盒提供原倍标准品，建议按以下梯度稀释：

24μg/ml（5号标准品）：150μl原倍标准品加150μl稀释液

12μg/ml（4号标准品）：150μl 5号标准品加150μl稀释液

6μg/ml（3号标准品）：150μl 4号标准品加150μl稀释液

3μg/ml（2号标准品）：150μl 3号标准品加150μl稀释液

1.5μg/ml（1号标准品）：150μl 2号标准品加150μl稀释液

PCR反应体系配置（40μL体系）

在PCR管中加入以下成分：

反应预混液：20μL

引物混合液：5μL

荧光染料：2μL

模板DNA：10μL（建议设置两个不同浓度）

灭菌水：补足至40μL

反应程序

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：95℃ 10分钟

扩增循环（40个循环）：

变性：95℃ 15秒

退火/延伸：60℃ 60秒（采集荧光信号）

结果分析

根据标准曲线计算样品中病毒核酸含量

阳性对照应出现典型扩增曲线，阴性对照无扩增

样品Ct值≤35且扩增曲线典型判为阳性

注意事项

实验前请仔细阅读说明书

所有试剂使用前应充分混匀并短暂离心

避免反复冻融试剂

操作过程中注意防止交叉污染

建议在专业实验室由经过培训的人员操作

储存条件

-20℃避光保存，有效期12个月。避免反复冻融，解冻后请于4℃保存并在1周内使用完毕。

预期性能

检测灵敏度：≥10拷贝/反应

特异性：与牛常见病原体无交叉反应

批内变异系数：≤5%

批间变异系数：≤10%

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