山羊疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

山羊疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，针对山羊疱疹病毒1型或2型的高度保守序列设计特异性引物，确保与相近病原体无交叉反应。灵敏度可达100~1000拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10^1~10^6拷贝/μL），支持定性和定量分析。

试剂盒组成

2×qPCR MagicMix：预混含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲液（500 μL）。

荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）：用于标准品梯度稀释。

病毒特异性引物混合液（100 μL）：针对CpHV-1或CpHV-2设计。

阳性对照（1×10^7~10^8拷贝/μL）：无传染性DNA片段（50 μL）。

DNA病毒裂解液（试用装）：可选用于样本前处理（9 mL）。

使用手册：含详细操作流程及数据分析方法。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/QuantStudio系列

安捷伦MX3000P/3005P

Roche LightCycler

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf Mastercycler ep realplex

操作步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（6~1号或7~2号），每管加45 μL稀释液。

取阳性对照依次稀释（如6号管加5 μL 10^7拷贝/μL，得10^6拷贝/μL），涡旋混匀后冰上暂存。

2. PCR反应体系配制（20 μL/反应）

| 成分 | 体积（μL） |

| 2×qPCR MagicMix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| ROX（可选） | 0.4 |

| ddH₂O | 补至20 |

3. 扩增程序

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

注意事项

分区操作：标准品稀释需在独立区域完成，避免气溶胶污染。

质量控制：建议每批次实验包含阴性对照（无模板对照）及阳性对照。

应用限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

引物特异性：1型与2型试剂盒引物不可混用，需根据目标病毒选择对应产品。

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