海豹分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

产品特点

即开即用：预混PCR反应体系（含酶、dNTPs、缓冲液等），仅需加入DNA模板即可进行扩增。

高特异性：引物针对海豹分枝杆菌基因组保守区域设计，与其他分枝杆菌或常见微生物无交叉反应。

质量控制：提供阳性对照，用于区分假阴性结果；建议设置阴性对照（NTC）以排除污染。

兼容性：含上样染料，扩增产物可直接用于电泳分析（需用户自备电泳设备）。

灵敏度：可检测低拷贝数模板，适用于科研用途（非临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分编号 | 组分名称 | 体积/含量 | 包装颜色 |

| 1 | PCR预混液（含染料） | 1 mL | 红盖 |

| 2 | 超纯水（无核酸酶） | 1 mL | 亮黄色 |

| 3 | 海豹分枝杆菌特异性引物混合液 | 50 μL | 透明 |

| 4 | 阳性对照（海豹分枝杆菌DNA） | 20 μL | 蓝色 |

操作步骤

1. 试剂准备

解冻：将预混液、引物混合液置于冰上缓慢解冻（避免反复冻融）。

混匀：轻轻颠倒5次，短暂离心（1000 rpm，10秒）后置于冰上备用。

2. 反应体系配置（单次40 μL体系）

| 组分 | 体积 |

| PCR预混液 | 20 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| DNA模板 | 2 μL（建议浓度10–100 ng/μL） |

| 超纯水 | 补足至40 μL |

注意：

推荐设置3次技术重复以提高数据可靠性。

阴性对照：以超纯水替代DNA模板；阳性对照使用试剂盒提供标准品。

3. 荧光定量PCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 | 否 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 40 | 是（SYBR通道） |

数据分析：

使用仪器配套软件分析扩增曲线和Ct值。

若阳性对照无信号或阴性对照出现扩增，需排查污染或试剂失效。

注意事项

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（分装建议）。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

废弃物处理：实验废弃物需按生物危害垃圾处理。

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