结核分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

检验原理

本试剂盒采用实时荧光定量PCR技术（染料法），通过特异性引物及荧光染料（如SYBR Green）对结核分枝杆菌复合群（MTBC）的保守基因序列（如IS6110插入序列和MPB64蛋白基因）进行扩增检测。荧光信号随扩增产物积累而增强，通过CT值判定样本中结核分枝杆菌的存在及载量。

试剂组成

反应液：含PCR缓冲体系、dNTPs、荧光染料等（500μL×2管）

酶混合液：热启动Taq DNA聚合酶（50μL×1管）

阳性质控品：结核分枝杆菌DNA（50μL×1管，浓度1×10^8拷贝/μL）

阴性质控品：无核酸酶水（250μL×1管）

说明：不同批号组分不可混用。

储存条件及有效期

储存：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。

有效期：12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500

安捷伦 MX3000P/3005P

Roche LightCycler

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf Mastercycler ep realplex

样本要求

痰液：晨起漱口后采集深部痰液，置于无菌容器。

肺泡灌洗液/脑脊液：无菌采集后立即送检。

咽拭子：专用拭子擦拭咽后壁及扁桃体，避免接触舌部，迅速放入保存液。

检测性能

检测限：1×10^3拷贝/mL

线性范围：2×10^3~1×10^8拷贝/mL

特异性：与常见呼吸道病原体无交叉反应。

操作步骤

DNA提取：使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA。

标准曲线制备（选做）：

将阳性质控品按10倍梯度稀释（10^8~10^3拷贝/μL），用于定量分析。

PCR体系配制（20μL/反应）：

反应液10μL + 酶液2μL + 模板DNA 2μL + 无核酸酶水6μL。

扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）

熔解曲线分析（染料法需验证特异性）。

结果判读

阳性：CT值≤38且熔解曲线峰值与标准品一致。

阴性：无CT值或CT值>38。

注意事项

实验需分区操作（样本制备区、试剂配制区、扩增区），避免污染。

仅限专业医疗机构使用，结果需结合临床其他指标综合判断。

公司正在出售的产品