肝胰腺坏死性细菌(虾肝胰腺坏死性细菌)染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

检验原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，结合特异性荧光探针，实现对虾肝胰腺坏死性细菌（EMS/AHPND病原）DNA的高灵敏度检测。采用UDG/dUTP防污染系统，可在室温条件下有效降解残留扩增产物，避免交叉污染。反应体系为单管封闭式设计，操作简便，扩增与检测同步完成。

产品用途

适用于对虾组织样本中急性肝胰腺坏死病病原体的特异性核酸检测，可用于养殖场病害监测、实验室诊断及流行病学调查。

性能参数

灵敏度：100拷贝/反应（线性范围10¹–10⁶拷贝/μL，参考同类细小病毒试剂盒数据）

特异性：与对虾白斑综合征病毒（WSSV）、桃拉综合征病毒（TSV）无交叉反应

重复性：批内CV<3%，批间CV<5%（n=8次重复实验）

反应时间：全程约2.5小时（含样本前处理1小时）

试剂盒组成

（50次/盒）

组分 规格 用途

2×SYBR Green qPCR Mix 500μL 含热启动DNA聚合酶、dNTP、染料

HPV特异性引物混合液 100μL (10μM) 扩增靶基因保守区

阳性对照（质粒DNA） 50μL (1×10⁸ copies/μL) 验证反应有效性（无传染性片段）

核酸释放剂（试用装） 1mL 快速裂解病毒释放DNA

关键操作要点

样本采集与保存：

肝胰腺组织需液氮速冻后-80℃保存，避免反复冻融导致DNA降解；

环境水样采集后需加入RNA酶抑制剂（如RNAlater），4℃运输不超过24小时。

反应体系与程序：

20μL体系：2×SYBR Green Mix 10μL + 引物混合液2μL + 模板DNA 5μL + 无酶水3μL；

扩增程序：95℃预变性10分钟 → 40循环（95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟，采集荧光）→ 溶解曲线分析（65℃→95℃，每0.5℃停留5秒）。

结果判读标准：

阳性：Ct≤35且溶解曲线单一峰值（Tm=83±1℃）；

可疑：35<Ct<38，需用柱提法重新提取DNA验证；

阴性：Ct≥38或无扩增（需同时满足阴性对照无Ct值）。

注意事项

实验需在标准PCR实验室进行，严格分区操作。

样本处理需使用无菌器械，避免外源DNA污染。

若Ct值≥35，建议重复检测并结合临床判断。

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