小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒 新品

小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒

产品简介:

小鼠分泌型免疫球蛋白A（sIgA）ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）含量的科研工具。该试剂盒广泛应用于免疫学研究，特别适用于黏膜免疫相关的科研实验，因为sIgA是黏膜免疫系统的主要效应分子，主要存在于乳汁、胃肠液、呼吸道分泌液等外分泌液中。

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。具体原理如下：

包被：用抗小鼠sIgA抗体包被微孔板，制成固相抗体。

结合：往包被的微孔中加入标准品或待测样本，样本中的sIgA与固相抗体结合。

检测：加入生物素标记的抗sIgA抗体和HRP标记的亲和素，形成夹心复合物。

显色：加入TMB底物，HRP催化TMB产生蓝色产物，加入终止液后变为黄色。

测定：在450nm波长下测定吸光度（OD值），样本中sIgA浓度与OD值呈正相关。

主要特点

灵敏度：最低检测浓度可达0.094-0.1 ng/mL。

检测范围：通常为0.156-10 ng/mL。

特异性：可特异性检测小鼠sIgA，与类似物无明显交叉反应。

精密度：批内差CV<8%，批间差CV<10%。

样本类型：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、尿液等多种液体样本。

操作步骤（简要）

准备：试剂和样本平衡至室温，按需稀释洗涤液。

加样：设标准品孔和样本孔，加入标准品或样本，37℃温育30-60分钟。

洗涤：洗板5次，去除未结合物质。

加检测抗体：加入生物素标记抗体，37℃温育30分钟。

加酶：加入HRP标记亲和素，37℃温育30分钟。

洗涤：再次洗板5次。

显色：加入TMB显色液，37℃避光显色10-15分钟。

终止：加入终止液，反应终止。

测定：在450nm波长下测定OD值，绘制标准曲线，计算样本sIgA浓度。

样本处理

血清：室温凝固或4℃过夜，离心取上清。

血浆：EDTA或肝素抗凝，离心取上清。

组织匀浆：用PBS研磨，离心取上清。

其他：细胞培养上清、尿液等也需离心取上清。

保存：样本可分装冻存于-20℃，避免反复冻融。

注意事项

试剂平衡：使用前需平衡至室温。

洗板：正确洗涤是关键，避免交叉污染。

显色：避光操作，控制显色时间。

标准曲线：每次实验需做标准曲线和复孔。

样本浓度：过高时需稀释样本。

避免污染：所有试剂和样本应避免交叉污染。

如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

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注意事项

科研用途：仅供科研实验使用，不可用于临床诊断。

操作规范：严格按照说明书操作，避免交叉污染，确保实验结果准确。