小鼠非组织特异性碱性磷酸酶(ALPL)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

实验原理

试剂盒采用双抗体夹心法。预先包被ALPL捕获抗体的微孔板依次加入标准品和待测样本，样本中的ALPL与固相抗体结合。随后加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，催化底物TMB显色，颜色深浅与ALPL浓度正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中的ALPL浓度。

试剂盒组成

预包被抗体的酶标板：用于固相抗体的固定。

标准品：已知浓度的ALPL溶液，用于绘制标准曲线。

生物素标记的检测抗体：与ALPL结合。

HRP标记的链霉亲和素：催化显色反应。

显色底物（TMB）：在HRP作用下显色。

终止液：终止显色反应。

洗涤液：用于洗涤未结合的试剂。

样本稀释液：用于稀释待测样本。

检测范围与灵敏度

检测范围：通常为0.156-10ng/mL或15.63-1000pg/mL。

灵敏度：最低检测浓度为12.8pg/mL或9.38pg/mL。

操作步骤

准备试剂和样本：按说明书准备试剂，处理样本。

加样：将标准品和样本加入酶标板孔中。

温育：在指定温度下孵育，使抗体-抗原充分结合。

洗涤：洗去未结合的试剂，减少背景干扰。

加酶标抗体：加入生物素标记的检测抗体和HRP标记的链霉亲和素。

显色：加入TMB底物，避光孵育显色。

终止反应：加入终止液，终止显色。

读数：使用酶标仪在450nm波长下测定OD值。

计算：根据标准曲线计算样本中的ALPL浓度。

注意事项

样本处理：血清、血浆需离心处理，避免反复冻融。

试剂保存：试剂盒需按说明书保存，避免失效。

操作规范：使用一次性吸头，避免交叉污染；严格按步骤操作，确保结果准确性。

适用范围

本试剂盒适用于科研领域，用于检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清液及相关生物液体中的ALPL浓度，不适用于临床诊断。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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