肠出血性大肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

肠出血性大肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术（如SYBR Green I），专为检测肠出血性大肠杆菌（EHEC）设计，适用于O157:H7等血清型的高灵敏度、高特异性核酸定性或定量分析。广泛应用于食品安全监测、环境样本检测（如水体）及临床研究（如粪便样本），但需注意仅限科研或兽医诊断用途，不可用于人类临床诊断。

产品组成

| 成分 | 规格/包装 | 功能说明 |

| 2×qPCR Buffer | 500μL（红盖） | 含dNTPs、Mg²⁺及优化缓冲液，支持扩增反应 |

| SYBR Green I染料 | 50μL（绿色管） | 荧光标记染料，特异性结合双链DNA并发出信号 |

| 特异性引物混合液 | 100μL（白盖） | 针对EHEC保守基因（如rfbE、fliC或stx1/stx2）设计 |

| 阳性对照 | 50μL（黄盖） | 人工合成DNA片段（1×10⁸拷贝/μL），用于实验质控 |

| 阴性对照 | 1mL（亮黄色） | 超纯水，监控污染及背景信号 |

| DNA释放剂（试用装） | 50次（绿盖） | 快速裂解样本，免提取操作 |

注意事项：

不同批号组分禁止混用，阳性对照需单独存放以避免污染。

运输及保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

技术原理

染料结合：SYBR Green I嵌入双链DNA小沟，在激发光下发射荧光信号。

信号累积：PCR扩增过程中，荧光强度与产物量成正比，实现实时定量。

熔解曲线分析：通过产物熔解温度（Tm）区分特异性扩增与非特异性产物（如引物二聚体）。

性能参数

灵敏度：最低检测限达100拷贝/反应。

特异性：引物针对EHEC高度保守区设计，无交叉反应。

线性范围：定量检测时覆盖至少5个数量级（如10²~10⁷拷贝/μL）。

操作流程

样本处理：使用DNA释放剂或常规提取法获取模板DNA。

反应体系：按20μL体系配制（含模板DNA、引物、Buffer及染料）。

上机检测：适用于ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。

数据分析：通过阈值循环数（Ct值）定性或标准曲线法定量。

适用仪器

兼容ABI 7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler 480、Bio-Rad CFX等机型。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免气溶胶污染。

建议重复检测以排除假阴性/阳性结果。

若需定量，需同步运行标准品梯度稀释系列。

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