猪血凝性脑脊髓炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测猪血凝性脑脊髓炎病毒（Porcine Hemagglutinating Encephalomyelitis Virus, PHEV）的核酸。适用于科研领域的定性或定量分析，具有高灵敏度和特异性，操作便捷，即开即用。

检测原理

通过特异性引物和荧光染料标记探针，靶向扩增病毒保守区域核酸，实时监测荧光信号变化，结合Ct值判定病毒载量或阴阳性结果。

试剂盒组分

预混反应液（含酶、dNTPs、缓冲液等）

阳性对照（已知浓度PHEV核酸）

阴性对照（无核酸酶水）

使用说明书

操作步骤

样本处理

在生物安全柜中提取样本RNA，避免降解（操作环境0-4℃）。

使用无核酶耗材，分区操作（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区）。

反应体系配制

按20μL体系配制：加入模板RNA、预混反应液及对照品。

短暂离心去除气泡，避光保存反应液。

PCR扩增程序

逆转录：50℃ 10-15分钟；

预变性：95℃ 2-5分钟；

循环阶段（40-45个循环）：95℃ 10-15秒，60℃ 30-60秒（采集荧光信号）。

结果分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且扩增曲线典型；

样本Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35<Ct<40需复测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

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严格分区操作，避免交叉污染（使用滤芯吸头、独立实验服及仪器）。

试剂使用前需充分融化混匀，瞬时离心。

反应液避光保存，避免反复冻融。

每次实验必须设置阴/阳性对照。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

技术参数

检测限：≤100拷贝/μL（具体以优化实验为准）；

线性范围：5个数量级（定量检测适用）；

规格：50次/盒（20μL体系）。

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