等孢球虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用荧光染料法（SYBR Green I或其他等效染料）进行等孢球虫DNA的定量PCR检测，适用于临床样本、环境样本或实验研究中的等孢球虫特异性核酸定量分析。试剂盒包含预混反应体系，操作简便，灵敏度高，可检测低至单拷贝的靶标DNA。

检测原理

荧光染料特性：

游离染料的吸收峰为471 nm，与DNA结合后吸收峰偏移至500 nm，发射峰为530 nm。

荧光信号强度与扩增产物量成正比，通过Ct值定量目标DNA浓度。

标准曲线法：

以阳性对照浓度的对数（log值）为横坐标，Ct值为纵坐标绘制标准曲线。

待测样本的Ct值通过标准曲线换算为DNA浓度。

试剂盒组成

预混反应液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及优化浓度的荧光染料。

阳性对照：已知浓度的等孢球虫标准DNA。

阴性对照：无核酸酶水。

其他组分：必要时包含内参引物或校准品。

操作步骤

样本处理：提取待测样本DNA，建议使用柱提法或磁珠法。

反应体系配制（以20 μL为例）：

预混液10 μL + 引物混合液2 μL + 模板DNA 2 μL + 无核酸酶水补至20 μL。

扩增程序（需根据仪器调整）：

预变性：95℃ 3分钟；

循环阶段：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40个循环。

数据分析：

仪器软件自动生成扩增曲线和Ct值，通过标准曲线计算样本浓度。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶标DNA。

特异性：引物设计针对等孢球虫保守序列，避免交叉反应。

重复性：批内和批间变异系数（CV）≤5%。

注意事项

避免反复冻融试剂，解冻后需涡旋混匀。

操作时需佩戴手套，防止核酸污染。

荧光信号采集需避光，建议使用光学盖膜密封反应板。

储存与有效期

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月（见包装标签）。

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