绵羊鞭虫染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品用途

本试剂盒基于SYBR Green I荧光染料法，用于绵羊粪便、肠道组织或环境样本中绵羊鞭虫（Trichuris ovis）特异性DNA片段的定性及相对定量检测，适用于：

绵羊鞭虫病的临床诊断

牧场寄生虫防控监测

治疗效果评估

流行病学调查

检测原理

DNA提取： 样本中提取基因组DNA。

qPCR扩增： 使用绵羊鞭虫特异性引物对靶基因（如ITS-2或18S rRNA基因保守区）进行扩增。

荧光信号采集： SYBR Green I染料嵌入双链DNA，释放荧光信号，强度与产物量成正比。

结果分析： 通过Ct值（循环阈值）判定目标DNA是否存在，并依据标准曲线进行相对定量。

试剂盒组成

| 组分 | 48T用量 | 96T用量 | 储存条件 |

| 2× SYBR Green qPCR Master Mix | 1.25 mL × 1 | 2.5 mL × 1 | -20℃ |

| 绵羊鞭虫 qPCR 引物混合液（干粉/预混） | 50 μL × 1 | 100 μL × 1 | -20℃ |

| ddH₂O（无核酸酶） | 1 mL × 1 | 1 mL × 2 | 室温 |

| 阳性对照（Trichuris ovis DNA） | 50 μL × 1 | 50 μL × 1 | -20℃ |

| 阴性对照（无核酸水） | 1 mL × 1 | 1 mL × 1 | 室温 |

注： 需自备DNA提取试剂、qPCR仪及配套耗材。

样本要求

类型： 绵羊新鲜粪便（推荐）、肠道内容物、固定组织。

处理： 粪便样本需尽快提取DNA或保存于-80℃；组织样本需匀浆后提取。

DNA纯度： OD260/280 ≈ 1.8–2.0，浓度 ≥ 20 ng/μL。

操作步骤

1. DNA提取

使用商用粪便/组织DNA提取试剂盒（如QIAamp PowerFecal Kit）按说明书操作。

2. qPCR反应体系配制（20 μL/反应）

| 组分 | 体积 |

| 2× SYBR Green Mix | 10 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| 模板DNA | 2 μL (≤100 ng) |

| ddH₂O（无核酸酶） | 补足至 20 μL |

3. qPCR程序设置（以ABI 7500为例）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | | 是 |

| 熔解曲线 | 60℃→95℃ | 按仪器默认 | 1 | 是 |

结果判读

阳性： Ct ≤ 35.0，且熔解曲线出现单一特异峰（Tm ≈ 82±1℃）。

可疑： Ct 35.1–38.0，建议重复检测。

阴性： 无Ct值或Ct > 38.0。

质控要求：

阳性对照：Ct ≤ 30.0

阴性对照：无扩增曲线

熔解曲线：单峰且Tm值匹配

性能参数

灵敏度： 检出限 ≤ 10 拷贝/μL（质粒标准品）

特异性： 不与捻转胃虫（Haemonchus contortus）、肝片吸虫（Fasciola hepatica）等常见寄生虫交叉反应

重复性： CV < 5%（同批次）

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。

熔解曲线分析是区分非特异产物的关键步骤。

若样本存在抑制物（如粪便色素），建议稀释模板后复测。

本产品仅限兽医诊断使用，不可用于人类临床。

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