猪鞭虫染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

试剂盒组成

反应体系：预混冻干粉末或液体，复溶后单次反应体积为20-25μL（具体规格见包装标注）。

阳性质控品：含猪鞭虫特异性靶序列，用于验证检测有效性。

阴性质控品：无靶标核酸，用于排除污染或非特异性扩增。

复溶剂（如适用）：用于溶解冻干组分。

说明书：含操作流程、数据分析及注意事项。

保存条件与有效期

保存温度：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月（以包装标注为准）。

运输条件：低温运输（冰袋或干冰）。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括但不限于：

ABI 7500

安捷伦MX3000P/3005P

Bio-Rad系列（如CFX96）

Eppendorf Mastercycler ep realplex

检测原理与性能

特异性：针对猪鞭虫保守序列设计引物探针，不与常见寄生虫或病原体发生交叉反应。

灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶标核酸。

一管式检测：减少开盖污染风险，适配染料法（如SYBR Green）或探针法（FAM通道）。

操作步骤

样本处理：按标准方法提取待测样本DNA。

反应体系配制（以20μL为例）：

模板DNA：2-5μL

预混反应液：10μL

阴/阳性质控品：各2μL

补足无核酸酶水至总体积。

PCR程序：

预变性：95℃ 2分钟

循环扩增（45次）：95℃ 10秒 → 60℃ 35秒（FAM通道采集信号）

结果判读

定量分析：通过标准曲线计算样本拷贝数。

定性分析：

阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测，重复后Ct<40判为阳性。

注意事项

实验分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

阴性质控品应无扩增，阳性质控品Ct值需≤30，否则实验无效。

废弃物品需经消毒处理后按生物危害垃圾处置。

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