丙型流感病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒基于实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）技术，结合特异性引物与通用型荧光染料（如SYBR Green），用于体外定性检测人鼻咽拭子、痰液或支气管灌洗液样本中的丙型流感病毒RNA。

适用场景：临床诊断、流行病学监测、科研分析。

检测原理

RNA提取：样本中病毒RNA经纯化富集

RT-PCR扩增：

逆转录（RT）：病毒RNA反转录为cDNA

荧光定量PCR：使用特异性引物扩增靶基因（如HEF基因保守区），SYBR Green染料嵌入双链DNA发出荧光信号

实时监测：通过荧光阈值（Ct值）判定病毒载量

试剂盒组分

| 组分名称 | 规格 | 保存条件 |

| ICV RT-PCR反应预混液 | 1.0 mL × 2管 | -20℃ |

| 逆转录酶 | 50 μL × 1管 | -20℃ |

| RNase-Free 水 | 1.5 mL × 1管 | 室温 |

| ICV阳性对照（假病毒颗粒）| 100 μL × 1管 | -70℃ |

| ICV阴性对照（无核酸水） | 1 mL × 1管 | -20℃ |

注：预混液含dNTPs、Mg²⁺、SYBR Green I、耐热DNA聚合酶、稳定剂

需自备材料

RNA提取试剂盒（兼容柱法/磁珠法）

实时荧光定量PCR仪（适用通道：FAM/SYBR）

无菌无酶PCR管、吸头、离心机

冰盒、移液器（0.5-10 μL, 10-100 μL, 100-1000 μL）

性能参数

检测限（LOD）：≤ 200 copies/mL

特异性：不检出甲/乙型流感、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒等常见病原体

重复性：Ct值变异系数（CV）≤ 5%

线性范围：10² ~ 10⁸ copies/μL（R² > 0.99）

操作流程

1 RNA提取

按RNA提取试剂盒说明操作，最终溶于20-50 μL RNase-Free水。

2 RT-PCR反应体系（20 μL/反应）

| 组分 | 体积 |

| RT-PCR预混液 | 10 μL |

| 逆转录酶 | 0.5 μL |

| 模板RNA | 5 μL |

| RNase-Free 水 | 补足至20 μL |

3 PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 逆转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 关 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 关 |

| 扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 | 开 |

| | 60℃ | 30 sec | | |

熔解曲线分析：65℃ → 95℃（每0.5℃升1温，停留5 sec）

结果判读

阳性：Ct值 ≤ 38.0，且熔解曲线主峰Tm值在（85.5±1.5）℃

可疑：Ct值在38.1-40.0，建议重复检测

阴性：Ct值 = Undefined（或无扩增曲线）

无效实验：阳性对照Ct值正常且阴性对照无扩增

注意事项

严格遵守生物安全操作规范

避免试剂反复冻融（预混液分装使用）

样本应在采集后24小时内检测或-80℃保存

熔解曲线峰形异常提示引物二聚体或污染

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