伊氏李斯特菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

伊氏李斯特菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒用于快速、特异性地检测样品中伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii)的核酸含量，适用于食品、环境样品及临床样本中伊氏李斯特菌的定性或定量检测。

检测原理

本试剂盒采用SYBR Green荧光染料法实时定量PCR技术，靶向伊氏李斯特菌特异性基因序列设计引物。PCR扩增过程中，SYBR Green染料与双链DNA结合发出荧光信号，荧光强度与PCR产物量成正比，通过实时监测荧光信号实现对起始模板的定量分析。

试剂盒组成

主要组分

2× SYBR Green qPCR预混液（含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺等）

伊氏李斯特菌特异性引物混合液（冻干粉或液体）

阳性对照（伊氏李斯特菌DNA）

阴性对照（无核酸水）

ROX参比染料（部分机型需要）

可选组分

DNA提取试剂

无核酸酶水

PCR反应管或板

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融。有效期通常为12个月。

适用仪器

适用于ABI 7500、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler、Thermo QuantStudio等主流实时荧光定量PCR仪。

样本要求

样本类型：食品样品、环境拭子、临床样本等

DNA提取：建议使用商业化的细菌DNA提取试剂盒

DNA浓度：建议10-100ng/μL

样本体积：每反应2-5μL DNA模板

检测方法

实验前准备

试剂解冻后充分混匀，短暂离心

根据反应数计算所需试剂体积

在冰上配制反应体系

反应体系配制（以20μL体系为例）

| 组分 | 体积(μL) |

| 2× SYBR Green预混液 | 10 |

| 特异性引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2-5 |

| 无核酸酶水 | 补至20 |

PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 采集荧光 |

| 预变性 | 95℃ | 3min | 1 | 否 |

| 变性 | 95℃ | 15sec | 40 | 否 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30sec | 40 | 是 |

| 熔解曲线分析 | 60-95℃ | 按仪器要求 | - | 是 |

结果分析

阈值设定：通常取指数扩增期的荧光信号

阳性判断：Ct值≤35且有典型扩增曲线

阴性判断：无扩增曲线或Ct值>35

熔解曲线分析：确认产物特异性

性能参数

灵敏度：可检测10拷贝/反应的伊氏李斯特菌DNA

特异性：不与单核细胞增生李斯特菌等其他李斯特菌种交叉反应

线性范围：10¹-10⁸拷贝/反应

重复性：CV<5%

注意事项

实验操作应在无菌环境下进行，避免污染

试剂解冻后应避免反复冻融

建议设置阳性对照、阴性对照和空白对照

熔解曲线分析是必须步骤，用于确认扩增特异性

不同仪器可能需要调整ROX参比染料的用量

公司正在出售的产品