登革病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

登革病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒适用于临床或科研中疑似登革热患者样本（如血清、血浆）的登革病毒RNA定性检测，可辅助诊断登革病毒感染，覆盖所有四种血清型（DENV-1/2/3/4）。

检测原理

采用一步法实时荧光定量RT-PCR技术（染料法），针对登革病毒基因组保守区域（如3'非编码区）设计特异性引物，通过SYBR Green等荧光染料标记扩增产物，实时监测PCR过程中的荧光信号变化，实现对病毒RNA的定性检测。

试剂盒组成

RT-PCR反应缓冲液

登革病毒通用反应液（含引物、dNTPs等）

酶混合液（逆转录酶、热启动Taq DNA聚合酶）

阳性对照（灭活登革病毒RNA）

阴性对照（RNase Free H2O）

内参对照（可选，用于监测提取与扩增效率）

核心性能参数

检测限：≤100 copies/mL（灵敏度可达10²–10³ copies/mL）。

线性范围：2×10³–1×10⁸ copies/mL。

特异性：与其他黄病毒属病毒（如寨卡病毒、黄热病病毒）无交叉反应。

适用仪器：兼容ABI 7500、QuantStudio系列、伯乐CFX96、罗氏LightCycler等主流荧光PCR仪。

储存条件与有效期

储存：-20℃避光保存，避免反复冻融（运输需干冰或冰袋）。

有效期：12个月（生产日期见外包装）。

操作流程

样本处理：采集全血分离血清/血浆，推荐使用配套RNA提取试剂盒。

反应体系配制：按比例混合反应液、酶液、模板RNA及对照品（总体积20–50 μL）。

PCR程序设置：

逆转录（50℃, 15 min）→ 预变性（95℃, 2 min）→ 扩增（95℃ 10 s, 60℃ 30 s, 40循环）。

结果判读：

阳性：扩增曲线呈S型且Ct值≤35（阈值需根据仪器优化）。

阴性：无扩增曲线或Ct值>40（需排除抑制物干扰）。

注意事项

实验需在BSL-2实验室进行，避免气溶胶污染。

严格分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区）。

失效试剂表现为阳性对照无信号或阴性对照出现扩增。

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