病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于SYBR Green I染料法，专为病毒RNA的一步法荧光定量RT-PCR检测设计。通过整合反转录（RT）与实时定量PCR（qPCR）于同一反应体系，可高效完成病毒核酸的灵敏检测与定量分析，适用于临床样本、环境监测及科研领域。

核心组分

2×预混缓冲液：含优化反应缓冲体系、dNTPs及SYBR Green I染料。

酶混合液：包含耐热反转录酶（如Hifair® V）及热启动Taq DNA聚合酶（如UNICON® HotStart），确保高特异性扩增。

无RNase水：用于反应体系配制。

技术参数

灵敏度：可检测低至0.1 pg病毒RNA（高表达靶标）或单拷贝DNA。

动态范围：标准曲线线性范围达6个数量级（10^1–10^7拷贝/μL）。

特异性：熔解曲线分析确保扩增产物单一性，避免非特异性峰干扰。

稳定性：预混液在4℃下可稳定保存24小时，-20℃保质期24个月。

操作流程

反应体系配制（以20 μL为例）：

2×预混缓冲液 10 μL

酶混合液 1 μL

引物（10 μM）各0.4 μL

RNA模板 ≤5 μL

无RNase水补至20 μL。

反应程序：

反转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 5分钟

PCR扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环，信号采集）。

数据分析：

定量检测：通过标准曲线计算病毒载量（Ct值-log浓度线性拟合）。

定性判定：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30；样本Ct≤35判为阳性。

注意事项

样本要求：RNA需避免反复冻融，建议使用DNase预处理。

污染控制：分装试剂，避免气溶胶污染。

适用机型：兼容Rox/No Rox荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。

应用场景

病毒检测：如HIV、流感病毒、SARS-CoV-2等RNA病毒。

科研验证：基因表达分析、病毒载量监控。

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