木霉属通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用 SYBR Green I 荧光染料法，通过实时荧光定量PCR（qPCR）技术特异性检测环境或样本中 木霉属（Trichoderma spp.） 的DNA。适用于土壤、植物组织、发酵产物等样本的快速检测和定量分析。

检测原理

特异性引物：针对木霉属保守基因序列（如ITS、tef1α等）设计引物，确保高特异性。

SYBR Green I 染料：与双链DNA结合后发出荧光信号，荧光强度与PCR产物量成正比。

定量分析：通过标准曲线计算样本中木霉属DNA的初始拷贝数或浓度。

试剂盒组成

| 组分 | 体积/数量 | 用途 |

| 2× SYBR Green Master Mix | 1 mL × N | 含DNA聚合酶、dNTPs、染料 |

| 木霉属通用引物（F+R） | 50 μL × 2 | 特异性扩增 |

| ddH₂O（无核酸酶） | 1 mL | 阴性对照/稀释 |

| 阳性对照（木霉属DNA） | 50 μL | 反应体系验证 |

实验步骤

1. DNA提取

建议使用商用真菌DNA提取试剂盒或CTAB法提取样本DNA。

2. qPCR反应体系（20 μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× SYBR Green Mix | 10 |

| 正向引物（10 μM） | 0.5 |

| 反向引物（10 μM） | 0.5 |

| 模板DNA | 2 |

| ddH₂O | 7 |

3. qPCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 10 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |

| 熔解曲线 | 65℃→95℃ | 0.5℃/step | 1 |

数据分析

阈值设定：使用仪器软件自动分析Ct值（建议手动复核）。

标准曲线：以阳性对照梯度稀释（10^1~10^6拷贝/μL）建立线性方程（R²≥0.99）。

熔解曲线：单峰表明扩增特异性，多峰提示引物二聚体或污染。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免DNA污染。

建议设置 无模板对照（NTC） 和 阳性对照。

若样本Ct值＞35或熔解曲线异常，建议重复实验。

性能参数

图

灵敏度：≤10拷贝/反应

特异性：不与曲霉属（Aspergillus）、青霉属（Penicillium）等交叉反应。

重复性：CV值＜5%（同批次）。

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