耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于检测耐万古霉素肠球菌（VRE）的vanA/vanB基因。适用于科研领域，具有高灵敏度、高特异性及即开即用的特点，可完成50次20μL体系的荧光定量PCR反应。

检验原理

通过针对vanA/vanB基因高度保守区域设计特异性引物，利用荧光染料（如SYBR Green）与双链DNA结合释放信号的特性，实时监测PCR扩增过程中的荧光强度，实现目标核酸的定性与定量分析。

试剂组成

VRE扩增预混液：包含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。

阳性对照：浓度为1×10⁸拷贝/μL的vanA/vanB基因片段。

模板稀释液：用于标准曲线制备。

阴性对照：无核酸酶水。

操作步骤

标准曲线制备

标记6管，依次加入45μL模板稀释液。

梯度稀释阳性对照（10⁸~10³拷贝/μL），每步震荡混匀，冰上保存。

样品DNA制备

使用兼容的核酸纯化方法提取样本DNA，并设置阴阳性对照（N+2原则）。

qPCR反应体系

反应体系：20μL/反应，含10μL预混液、2μL模板、上下游引物各0.5μL、7μL无核酸酶水。

程序设置：

预变性：95℃ 3分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

数据分析

通过标准曲线计算样本中vanA/vanB基因拷贝数，阈值循环数（Ct值）≤35判定为阳性。

性能参数

灵敏度：最低检测限10³拷贝/μL。

特异性：不与常见肠道菌群DNA交叉反应。

线性范围：10³~10⁸拷贝/μL（R²≥0.99）。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

避免反复冻融试剂，操作需在无菌环境下进行。

不同仪器需优化扩增参数。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输方式：冰袋低温运输。

公司正在出售的产品