内阿米巴通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品用途

用于溶组织内阿米巴（Entamoeba histolytica）的定性及定量检测，仅限科研使用。

产品特点

高灵敏度：引物经优化设计，检测限低，可精准识别低拷贝数目标序列。

高特异性：基于高度保守区设计的引物，避免与其他微生物DNA/RNA发生交叉反应。

双功能检测：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

安全对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照，避免活体病原扩散风险。

稳定保存：-20℃避光保存，避免反复冻融。

试剂盒组成

反应体系：50次20μL荧光定量PCR反应所需试剂（含预混液、引物、染料等）。

阳性对照：1×10⁸拷贝/μL标准品（无传染性DNA片段）。

稀释液：荧光PCR专用模板稀释液。

操作步骤

1. 标准曲线制备（以6个10倍稀释梯度为例）

标记离心管：编号7至2，分别对应10⁷~10²拷贝/μL浓度梯度。

稀释操作：

向每管加入45 μL稀释液（需使用带芯枪头）。

取5 μL阳性对照（10⁸拷贝/μL）加入7号管，震荡混匀，得到10⁷拷贝/μL标准品。

依次梯度稀释至2号管（10²拷贝/μL）。

注意事项：稀释需在独立区域进行，避免污染。

2. PCR反应设置

体系配置：按20μL体系加入模板DNA、预混液及引物。

荧光参数：

染料游离态吸收峰471 nm，结合DNA后吸收峰500 nm，发射峰530 nm。

信号采集建议在复性或延伸阶段。

3. 数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算待测样本浓度。

定性检测：

阴性对照：Ct≥40；阳性对照：Ct≤30且扩增曲线典型。

样本判定：Ct≤35为阳性，Ct≥40为阴性；35<Ct<40需重复检测。

注意事项

图

安全防护：操作时需穿戴实验服、口罩及一次性手套。

避免污染：分区操作，使用带滤芯枪头。

存储条件：-20℃保存，避免反复冻融。

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