无乳支原体染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

无乳支原体染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用荧光定量PCR（qPCR）技术，通过特异性荧光染料与双链DNA结合，实现对无乳支原体（Mycoplasma agalactiae）DNA的高灵敏度、高特异性检测。适用于细胞培养、生物制品及临床样本中的支原体污染筛查。

检测原理

靶标基因：针对无乳支原体16S rRNA基因高度保守区域设计特异性引物。

荧光染料法：染料与扩增产物结合后释放荧光信号，通过实时监测CT值定量分析样本中支原体DNA含量。

内参校正：部分试剂盒含ROX参比染料，可校正加样误差及管间差异。

产品优势

高特异性：仅对柔膜菌纲（包括支原体、螺原体等）有效，无交叉反应。

高灵敏度：最低检测限达2-4个基因组/反应体系。

操作便捷：无需电泳，直接通过CT值判读结果。

快速检测：全程约1-2小时，含热启动Taq酶以减少非特异性扩增。

试剂盒组分

主反应混合液：含预混缓冲液、dNTPs、热启动Taq酶、荧光染料。

阳性对照（PC）：无乳支原体DNA标准品（建议稀释后使用）。

阴性对照（NC）：无核酸酶水。

ROX校正染料（部分型号可选）。

样本制备

DNA提取：建议使用商业化DNA提取试剂盒，设置N+2样本（含PC与NC）。

PC制备：取阳性对照10μL稀释至1000倍，体积与待测样本一致。

NC制备：以无核酸酶水作为阴性对照。

操作步骤

反应体系配制：按说明书比例混合主反应液、引物、模板DNA（建议20μL体系）。

PCR程序：

预变性：95℃ 5分钟

扩增循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）

数据分析：根据标准曲线计算CT值，判定样本阳性/阴性。

储存与稳定性

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月。

注意事项

实验环境需严格防污染，建议在超净台或PCR工作站操作。

若CT值异常，需检查抑制剂干扰或重新提取DNA。

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