发酵支原体染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

发酵支原体染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用特异性荧光染料与双链DNA结合的原理。在PCR扩增过程中，染料与产物结合释放荧光信号，通过实时监测荧光强度变化，实现对Mycoplasma fermentans DNA的定性与定量检测。

操作步骤

1. 样本处理（样本处理区）

1.1 样本前处理：按标准方法处理待测样本（如细胞培养上清、组织匀浆等）。

1.2 DNA提取：使用配套或通用DNA提取试剂盒提取样本DNA，建议使用无支原体污染的耗材。

2. 试剂配制（试剂准备区）

试剂盒组分（预混液、引物探针、阳性对照等）使用前需自然融化，涡旋混匀并短暂离心。

按反应数配制主混合液（Master Mix），避光保存。

3. 加样（样本处理区）

将待测DNA模板、阴性/阳性对照分别加入PCR反应管，避免气泡产生，密封管盖。

4. PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行qPCR仪：

预变性：95℃, 5 min

循环扩增（40 cycles）：95℃ 10 sec → 60℃ 30 sec（采集荧光信号）

5. 结果分析

定性检测：通过扩增曲线和Ct值判定样本是否阳性。

定量检测：以阳性对照标准品浓度的log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在独立区域进行，避免交叉污染。

防污染措施：使用一次性吸头、手套及专用工作服，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

试剂保存：反应液需避光保存，避免反复冻融。

质控要求：每批次实验需包含阴性对照（无模板）和阳性对照。

产品优势

高特异性：靶向Mycoplasma fermentans 16S rRNA基因保守区域。

高灵敏度：检测下限可达10 copies/μL。

快速便捷：无需电泳，通过实时荧光信号直接判读结果。

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