内罗毕羊病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测内罗毕羊病病毒（NSDV）核酸，具有高特异性、灵敏度（可达几百拷贝/反应）和快速检测特点。适用于临床样本、动物组织及环境样本的病毒检测。

产品组成

2×qPCR MagicMix：500 μL（预混含荧光染料，最大吸收光谱471 nm，结合DNA后为500 nm，发射光谱530 nm）。

荧光PCR专用模板稀释液：1 mL（用于阳性对照梯度稀释）。

NSDV特异性引物混合物：100 μL（针对病毒保守序列设计，无交叉反应）。

阳性对照（1×10⁸ 拷贝/μL）：50 μL（需独立稀释，避免污染）。

使用手册：1份。

注：需自备DNA模板、10×ROX（根据机型需求）。

样本处理

液体样本：取2-3 mL，13,000 rpm离心3分钟，弃上清，沉淀加50 μL DNA抽提液混匀，100℃裂解10分钟，离心后取5 μL上清用于PCR。

其他样本：按常规方法采集，-20℃保存，运输需泡沫箱加冰密封。

操作步骤

阳性对照稀释

标记6管，依次加入45 μL稀释液，梯度稀释阳性对照（10⁷–10² 拷贝/μL），每步换枪头并充分震荡。

稀释需在独立区域进行，避免污染。

PCR反应

反应体系：20 μL/反应（含5 μL模板）。

程序：

预变性：92℃ 5分钟；

扩增（30循环）：94℃ 60秒 → 50℃ 60秒 → 72℃ 60秒；

信号采集：复性或延伸阶段（530 nm）。

结果判读

阳性：Ct值<35，S型曲线；

阴性：Ct值>38或无Ct值；

可疑：Ct值35–38需复检，重复阳性则判定为阳性。

注意事项

操作分区进行，避免交叉污染；

试剂使用前充分混匀，避光保存；

实验后工作台需用10%次氯酸或75%酒精消毒；

阳性对照单独存放，运输保存期限1年（-20℃）。

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