肺炎支原体染料法荧光定量PCR试剂盒

肺炎支原体染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于荧光定量PCR技术（染料法或探针法），通过特异性引物和荧光探针/染料对肺炎支原体（MP）核酸进行体外扩增检测。染料法通过双链DNA结合染料（如SYBR Green）实时监测扩增产物，探针法则采用TaqMan探针实现靶序列特异性检测。灵敏度可达100拷贝/反应，特异性强，避免与其他病原体交叉反应。

试剂组成

反应液：含PCR缓冲体系、dNTPs等（500μL×2管）。

酶液：热启动Taq DNA聚合酶（50μL×1管）。

阳性质控品：肺炎支原体标准核酸（50μL×1管）。

阴性质控品：无核酸酶水（250μL×1管）。

规格：50T/盒（20μL体系/反应）。

储存与运输

保存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。

有效期：12个月。

运输：低温干冰或冰袋运输。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500

安捷伦 MX3000P/3005P

LightCycler（Roche）

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf Mastercycler ep realplex

样本要求

采集类型：咽拭子（专用采样拭子，避免触及舌部）。

处理：立即置于无菌采集管中密封，-80℃保存（长期）或4℃暂存（24小时内检测）。

DNA提取：需自备商业化核酸提取试剂盒。

操作流程

样本制备：提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系配制：按比例混合反应液、酶液及模板DNA。

PCR扩增：

预变性：95℃ 5分钟；

循环参数：95℃ 15秒 → 60℃ 45秒（40循环，荧光采集）。

结果判读：

定性：Ct值≤38且扩增曲线呈S型为阳性；

定量：需标准曲线（线性范围≥5个数量级）。

质量控制

每批次检测需包含阴/阳性质控：

阳性对照：Ct值应在预期范围内；

阴性对照：无扩增信号（Ct值≥40或无曲线）。

注意事项

不同批号组分不可混用；

避免试剂反复冻融，分装保存；

实验环境需分区（试剂准备、样本处理、扩增区），防止污染；

临床诊断需经国家药监局批准，科研用途需明确标注。

性能参数

灵敏度：100拷贝/反应（染料法）；20 copies/μL（LAMP法，可选）。

特异性：不与肺炎衣原体等常见呼吸道病原体交叉反应。

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