滑液支原体染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

滑液支原体染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于荧光定量PCR技术，针对滑液支原体（Mycoplasma hyosynoviae）特异性核酸序列设计引物和探针，通过染料法检测体系实现对病原体DNA的定性或定量分析，适用于临床样本、培养物或环境样本的快速检测。

试剂组成

反应液：含荧光染料预混液（如SYBR Green）、dNTPs、缓冲体系等（500μL×2管）。

酶液：热启动Taq DNA聚合酶（50μL×1管）。

阳性质控品：滑液支原体特异性DNA片段（50μL×1管）。

阴性质控品：无核酸酶水（250μL×1管）。

注：不同批号组分不可混用，避免反复冻融（建议≤5次）。

储存与运输

储存条件：-20℃±5℃避光保存，有效期12个月。

运输要求：低温避光运输，避免反复冻融。

适用仪器

支持主流荧光定量PCR仪，包括但不限于：

ABI 7500

安捷伦 MX3000P/3005P

Bio-Rad CFX系列

Roche LightCycler

样本处理

样本类型：细胞培养上清、血清、关节液等体液。

DNA提取：

使用商业核酸提取试剂盒或酚-氯仿法提取样本DNA。

提取后DNA建议保存于-70℃，避免反复冻融（≤3次）。

操作步骤

1. 试剂准备

解冻：所有试剂置于冰上缓慢融化，轻弹混匀后短暂离心（1000 rpm，10秒）。

反应体系配置（以20μL为例）：

反应液 10μL

酶液 0.5μL

模板DNA 2μL

无核酸酶水补至20μL

2. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |

3. 数据分析

定性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈“S”形判为阳性。

定量分析：以阳性质控品标准曲线（log浓度 vs Ct值）计算待测样本浓度。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质控要求：每批次实验需包含阴/阳性质控。

污染控制：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇清洁台面及移液器。

避光保存：反应液需避光，避免荧光淬灭。

局限性

检测结果需结合临床指征及其他实验室检查综合判断。

极低浓度样本（Ct值>35）建议重复检测确认。

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