卡萨诺尔森林病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

卡萨诺尔森林病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

技术原理与特点

染料法荧光定量PCR：基于SYBR Green I染料与双链DNA结合发光的原理，实时监测扩增曲线。

高灵敏度与特异性：引物针对KFDV高度保守区设计，检测限≤50 copies/反应，线性范围达5个数量级。

内控优化：含阳性对照（无传染性DNA片段），避免假阴性；阴性对照确保无污染。

即开即用：预混反应体系，仅需提供RNA模板。

操作流程

标准曲线制备（10^2–10^7 copies/μL）

稀释阳性对照：

使用专用稀释液进行6个10倍梯度稀释（标记为2–7号管）。

7号管加入5μL阳性对照（1×10^8 copies/μL），震荡混匀，得10^7 copies/μL标准品，依次稀释至10^2 copies/μL。

注意：操作需在独立区域，避免交叉污染。

加样：

每反应管加入：10μL预混液、2μL引物探针混合液、5μL模板（标准品/待测样本）。

PCR扩增程序

逆转录：45℃ 25分钟

预变性：95℃ 2分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 45秒（荧光采集）

结果判读

阳性：Ct值≤36，且扩增曲线呈指数增长。

临界值：36<Ct<40需重复检测，二次结果需指数增长。

阴性：无扩增曲线或Ct值≥40。

注意事项

生物安全：

疑似样本需在BSL-3级实验室处理，废弃物121℃高压灭菌30分钟。

运输包装符合UN2814标准。

样本要求：

发病5天内静脉血3–5mL，避免溶血。

推荐使用QIAGEN Viral RNA Kit提取RNA，Carrier RNA添加量1μg/μL。

质控：

阳性对照Ct值应<35，阴性对照无扩增。

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