牛赤羽病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒用于牛赤羽病毒（Bovine Akabane Virus）RNA的荧光定量RT-PCR检测，具有高灵敏度、特异性及稳定性。采用荧光探针法，可实现病毒核酸的绝对定量分析，适用于临床样本、动物组织及环境样本的快速筛查。

检测原理

RT-PCR技术：通过逆转录酶将病毒RNA逆转录为cDNA，再经Taq DNA聚合酶扩增目标片段。

荧光信号检测：反应体系中包含特异性引物、探针及荧光染料，扩增过程中荧光信号与产物量成正比，通过标准曲线计算病毒拷贝数。

试剂盒组成

核心组分：

RT-PCR预混液（含逆转录酶、Taq酶、dNTPs、Mg²⁺）

牛赤羽病毒特异性引物及探针

阳性对照（灭活病毒RNA）

阴性对照（DEPC水）

标准品梯度（10¹~10⁶ copies/μL）

辅助试剂：

核酸提取液（溶液A、B）

稀释液（C）

溶解液（tD）

操作步骤

1. 样本前处理

固体样本：取1-5 mg组织，加入100 μL溶液A工作液，95℃裂解10分钟，冷却后加入10 μL溶液B混匀，离心取上清。

液体样本：直接取5 μL加入裂解液，同法处理。

2. PCR反应体系配制（40 μL体系）

| 成分 | 体积（μL） |

| RT-PCR预混液 | 20 |

| 引物探针混合液 | 2 |

| 模板DNA（上清液） | 5 |

| DEPC水 | 补足至40 |

3. 扩增程序

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增循环（45次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）

结果判读

标准曲线：以标准品Ct值为纵坐标、拷贝数对数为横坐标绘制曲线，计算样本病毒载量。

阈值设定：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

注意事项

实验环境：严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

质量控制：每批次实验需包含阳性对照（Ct值应在预期范围内）及阴性对照（无扩增）。

仪器要求：需使用荧光定量PCR仪，支持FAM通道检测。

储存与有效期

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月。

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