皮炎外瓶霉染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

检测原理

基于SYBR Green染料法实时荧光PCR技术，针对皮炎外瓶霉基因保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增，实现定性及定量分析。

包装规格：50次/盒。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

试剂盒组成

扩增反应液：含PCR缓冲液、dNTPs、SYBR Green染料等。

阳性对照：皮炎外瓶霉特异性核酸模板（需单独存放，避免污染）。

阴性对照：无核酸酶水。

酶混合物：含热启动Taq DNA聚合酶。

样本要求

样本类型：临床标本（如组织、体液）、环境样本或培养物。

采集与保存：

常规方法采集，避免污染。

短期运输需低温（冰袋或干冰），长期保存于-20℃。

自备试剂：样本DNA提取试剂（如柱式或磁珠法提取试剂）。

操作步骤

样本处理：

提取样本DNA，建议使用商品化核酸提取试剂盒。

测定DNA浓度并调整至适宜范围（如20–100 ng/μL）。

反应体系配制：

按说明书比例混合扩增液、酶及模板DNA，总体积通常为20–25 μL。

避免气泡，短暂离心后上机。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 2–5分钟。

扩增循环：95℃ 10–15秒，60℃ 30–60秒（40–45循环）。

熔解曲线分析：60–95℃（染料法必需步骤）。

注意事项

防污染措施：

分区域操作（样本处理、试剂配制、扩增区分离）。

使用一次性耗材（吸头、手套），实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

试剂使用：

所有组分使用前需完全融化并混匀，避免反复冻融。

反应液需避光保存。

质量控制：

每批实验需包含阴/阳性对照，确保无假阳性或假阴性。

熔解曲线应呈现单一峰，否则需排查非特异性扩增。

结果判读

阳性：Ct值≤35，且熔解曲线与阳性对照一致。

可疑：Ct值35–40，建议重复检测。

阴性：无扩增曲线或Ct值＞40。

局限性

检测结果需结合临床或其他实验室数据综合判断。

极低浓度样本（＜10拷贝/μL）可能影响准确性。

公司正在出售的产品