普雷沃菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对普雷沃菌属高度保守基因区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测靶标核酸的扩增过程，实现定性或定量检测。扩增曲线与Ct值用于分析样本中普雷沃菌属的核酸含量。

试剂组成

| 组分名称 | 规格 |

| 普雷沃菌属扩增预混液 | 1 mL ×1管 |

| 阳性对照（无传染性DNA）| 50 μL ×1管 |

| 阴性对照（无核酸水） | 50 μL ×1管 |

| 说明书 | 1份 |

注意：不同批号组分不可混用，试剂盒内组分可满足50次检测。

储存条件及有效期

储存温度：-20℃±5℃，避光保存，避免反复冻融（≤7次）。

有效期：12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/QuantStudio系列

Bio-Rad CFX系列

Roche LightCycler系列

Eppendorf Mastercycler ep realplex

自备耗材：

无核酸酶的PCR管（0.2 mL）、滤芯吸头（10/200/1000 μL）、离心机、移液器等。

样品要求

样本类型：口腔分泌物、肠道内容物、临床培养物等（需符合《微生物样本采集规范》）。

保存条件：

短期：-20℃（≤1周）；

长期：-70℃（≤6个月）；

运输：2~8℃冰袋，禁止反复冻融。

使用方法

1. 样本处理（需在无菌环境下操作）

提取核酸后，确保OD260/280比值在1.8~2.0之间。

2. 标准曲线制备（定量检测需执行）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），每个浓度设3复孔。

3. 反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 无核酸酶水 | 6 |

4. PCR程序

预变性：95℃ 5分钟；

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）；

熔解曲线分析：60~95℃（0.5℃/步）。

5. 结果判读

定性：Ct≤35为阳性，Ct≥40为阴性，35<Ct<40需复测。

定量：根据标准曲线计算拷贝数。

注意事项

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作时需穿戴防护装备（实验服、口罩、手套）。

避免试剂污染，分区操作（样本处理区、PCR配制区、扩增区）。

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