人胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒

人胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒

产品简介:

1. 基本介绍

目标分子：胰脂肪酶（Pancreatic Lipase, PL）是胰腺分泌的关键消化酶，分子量约48-50kDa，属于羧酸酯水解酶家族，特异性水解甘油三酯为甘油和游离脂肪酸。

生物学特性：

分子特征：含449个氨基酸，活性中心为Ser-His-Asp三联体

分泌调控：受胆囊收缩素（CCK）和进食刺激调节

生理功能：

肠道脂肪消化的核心酶

维持脂溶性维生素吸收

参与胆固醇代谢调节

临床意义：

急性胰腺炎诊断金标准（敏感性85-100%）

慢性胰腺炎进展监测

胰腺手术后功能评估

胰管梗阻性疾病筛查

2. 检测原理

双抗体夹心ELISA法：

捕获抗体：微孔板包被抗PL单克隆抗体（识别独特表位）

样本反应：PL与固相抗体特异性结合

检测抗体：加入HRP标记的抗PL多克隆抗体

显色系统：TMB显色，450nm主波长/630nm参比波长检测

3. 试剂盒组成

组分  规格  保存条件  关键说明

预包被微孔板  96T（可拆）  2-8℃（带干燥剂）  避免受潮

PL标准品  10-500 U/L（冻干粉）  -20℃  需精密复溶

酶标抗体  1.2mL  -20℃（避光）  避免反复冻融

样本稀释液  20mL  2-8℃  含蛋白酶抑制剂

TMB底物  10mL  2-8℃（避光）  开封后1月有效

终止液  10mL  室温  强酸注意防护

20×洗涤液  50mL  室温  需1:19稀释使用

封板膜  5张  室温  防止蒸发污染

4. 样本要求

适用样本类型：

血清（推荐无抗凝管）

血浆（肝素抗凝，避免EDTA）

腹水（需注明临床诊断）

样本处理规范：

采集后立即冰浴，1小时内离心（1500×g，15分钟，4℃）

分离后2小时内检测或-80℃保存（冻融≤2次）

避免使用溶血样本（血红蛋白>0.5g/dL）

脂血样本需备注（甘油三酯>500mg/dL可能干扰）

5. 检测流程

标准操作程序：

标准曲线制备：

梯度稀释：10、50、100、200、300、500 U/L

每孔100μL，建议复孔检测

关键步骤参数：

孵育条件：

样本孵育：37℃ 90±5分钟

酶标抗体：37℃ 60±3分钟

洗涤程序：300μL/孔，浸泡30秒，洗5次

显色控制：TMB避光反应15±1分钟

质量控制：

空白孔OD值<0.08

标准曲线R2≥0.99

质控品应在预期值±15%内

公司正在出售的产品：

如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。