人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)elisa试剂盒 新品

一、技术原理与创新特性：

多功能检测系统：

多形式识别技术：采用抗人uPA A链单抗（克隆U1）作为捕获抗体，结合B链检测抗体（克隆U3）实现酶原（pro-uPA）、活性uPA和uPA-PAI-1复合物的同步检测

活性状态分析：通过氨基苯甲脒（AMBA）预处理区分游离uPA与受体结合形式

抗干扰设计：添加纤溶酶抑制剂（Aprotinin）阻断体外激活干扰（验证交叉率<0.01%）

2025年技术升级：

新增纤溶活性检测模块（基于荧光底物S-2444）

标准品溯源至WHO国际标准（NIBSC 18/272）

微孔板采用仿生细胞外基质涂层（批内CV降至2.0%）

试剂盒配置与关键参数

标准组件清单：

预包被96孔板（8×12可拆，充氮包装）

重组人uPA标准品（7梯度：0.05-50 ng/mL，含质谱鉴定证书）

检测系统：

钌标记链霉亲和素（4℃避光稳定15个月）

三丙胺电化学发光底物（动态范围扩展20倍）

专用组织保存液（含广谱蛋白酶抑制剂）

性能指标：

参数  规格  临床意义

检测范围  0.05-50 ng/mL  覆盖生理和病理浓度

灵敏度  0.02 ng/mL  可检测微转移灶

精密度  板内CV<3%，板间CV<6%  符合ISO 13485标准

特异性  与tPA交叉反应<0.1%  确保检测特异性

实验操作标准化流程

样本处理规范：

血浆采集：必须使用CTAD抗凝管（抑制血小板释放）

稳定性数据：

4℃保存≤24小时（需立即添加抑制剂）

-80℃可保存1年（避免反复冻融）

特殊处理：

肿瘤组织需液氮速冻保存

伤口渗出液需离心去除细胞碎片

优化操作步骤：

激活处理：含25mM NaCl的Tris缓冲液（pH 8.8）预处理30分钟

加样策略：采用蛇形加样顺序减少边缘效应

关键孵育：37℃恒温振荡（700rpm）75分钟

信号检测：电化学发光读数（积分时间400ms）

临床应用与科研价值

疾病诊断临界值：

乳腺癌预后：组织>5 ng/mL预示无转移生存期缩短（HR=2.1）

肝纤维化分期：血清uPA/PAI-1比值>1.5提示F3-F4期

创伤愈合评估：创面渗出液<2 ng/mL预示延迟愈合

2025年研究前沿：

发现uPAR-uPA-integrin三元复合物调控肿瘤干细胞niche

uPA抑制剂（Upamostat）治疗胰腺癌进入III期临床

单细胞空间转录组揭示转移前微环境uPA梯度分布

质量控制与问题处理

质控标准：

标准曲线要求：5参数拟合R2≥0.996

必检参数：

空白信号<600 RLU

质控品回收率90-110%

故障排除指南：

问题现象  根本原因  专业处理

前带效应  抗原过量  进行1:50稀释复测

信号漂移  温度波动  使用带温度记录的孵育箱

背景升高  封闭不充分  增加封闭时间至2小时

公司正在出售的产品：

常见问题与避坑指南：

环节   风险点   避坑建议

试剂使用   混用   严禁混用不同品牌或不同批号的试剂盒组分（如A品牌的包被板+B品牌的酶标二抗），这会导致反应体系崩溃。

终止反应   顺序   加入终止液后，溶液由蓝变黄。此时应尽快读数，因为颜色可能会随时间轻微变化。

保存   剩余板条   未用完的酶标板条，需立即密封，放入自封袋中并加干燥剂，保存于 2-8℃，避免受潮和反复冻融。

环境   污染   避免试剂接触漂白剂或含漂白剂的物质，它们会破坏酶的活性，导致实验失败。

建议： 

在购买前，务必查看说明书中的“交叉反应”列表和“样本类型”说明。如果说明书宣称特异性极高（如CR0.1%），

但在你的实际样本中出现了大量假阳性，那可能需要优化洗涤步骤，或者考虑更换抗体特异性更强的试剂盒。