人甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒

人甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒

一、检测原理与技术特性:

双抗体夹心ELISA技术

捕获抗体：微孔板预包被抗PTH（1-84）单抗，特异性结合完整PTH分子（检测范围5–2500 pg/mL）。

信号放大：生物素标记的二抗与链霉亲和素-HRP联用，超敏TMB显色（灵敏度达1.5 pg/mL）。

抗干扰设计：含EDTA（抑制PTH降解）和异嗜性抗体阻断剂，避免与PTHrP交叉反应（＜0.01%）。

动态范围优化

覆盖生理水平（健康人血清10–65 pg/mL）至病理浓度（如肾性骨营养不良患者＞500 pg/mL）。

核心组分与样本要求

组分  技术参数

预包被96孔板  抗PTH（1-34）表位抗体固定化（批间差＜7%）

标准品  重组人PTH（1-84）（0、20、50、100、250、500、1000、2500 pg/mL）

适用样本  血清（首选，避免溶血）、血浆（EDTA抗凝），2小时内分离

特殊添加剂  含蛋白酶抑制剂（如AEBSF），2–8℃保存有效期18个月

临床应用与科研价值

钙磷代谢疾病诊断

原发性甲旁亢：PTH＞100 pg/mL伴高血钙（需联合血钙检测）。

继发性甲旁亢：慢性肾病（CKD）患者PTH水平与骨病进展相关（目标范围：CKD3-4期150–300 pg/mL）。

手术监测

甲状旁腺切除术后15分钟内PTH下降＞50%提示手术成功。

研究应用

PTH（1-34）片段（特立帕肽）治疗骨质疏松的疗效评估。

操作规范与质控要点

样本处理

采集后立即冰浴，30分钟内离心（避免PTH降解）。

避免使用肝素抗凝血浆（干扰钙离子结合）。

实验关键

温育条件：37℃避光45分钟，严格控时（±2分钟）。

洗涤液需含0.05% Tween-20（降低非特异性结合）。

质控标准

每板需含：标准曲线（R2≥0.99）、高/低值质控（CV＜8%）。

性能比较与注意事项

特性  优势  局限性

灵敏度  可检测1.5 pg/mL微量PTH  无法区分完整PTH与降解片段（如7-84）

特异性  与PTHrP交叉反应＜0.01%  样本稳定性差（需严格预处理）

通量  适配全自动平台（如Tecan Freedom EVO）  高脂血样本需超速离心

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。