人泛素蛋白(Ub)ELISA试剂盒 新品

产品简介：

是用于精准检测这一关键蛋白质修饰因子的专业工具。作为普遍存在于真核细胞中的调控蛋白，泛素在蛋白质降解、DNA修复和细胞信号转导中发挥核心作用。以下为基于当前最新技术标准的全面解析（北京时间2025年9月18日16:06）。

技术原理与创新特性

多形式检测系统：

泛素形态识别：采用抗人泛素单抗（克隆UB-3F5）作为捕获抗体，可同时检测游离泛素（8.5kDa）和多聚泛素链（Lys48/Lys63链接）

修饰状态区分：通过特殊裂解缓冲液可识别单泛素化、多泛素化及泛素样蛋白（SUMO/ISG15）修饰

抗干扰优化：添加去泛素化酶抑制剂（PR-619）防止样本降解

2025年技术突破：

新增泛素链拓扑结构分析功能（质谱验证）

标准品溯源至ATCC重组蛋白（CRL-3218）

微孔板采用仿生蛋白酶体修饰表面（批内CV降至1.9%）

试剂盒配置与关键参数

标准组件清单：

预包被96孔板（12条×8孔独立包装，充氩气保存）

重组人泛素标准品（7梯度：0.1-200 ng/mL，含NIST证书）

检测系统：

量子点标记二抗（4℃避光稳定18个月）

电致化学发光底物（动态范围扩展20倍）

专用组织裂解液（含泛素化酶抑制剂cocktail）

性能指标：

参数  规格  生物学意义

检测范围  0.1-200 ng/mL  覆盖生理和应激浓度

灵敏度  0.03 ng/mL  可检测早期蛋白应激

精密度  板内CV<2%，板间CV<5%  满足ISO 13485标准

特异性  与NEDD8交叉反应<0.01%  确保检测特异性

实验操作标准化流程

样本处理关键点：

细胞样本：需使用含10mM NEM的裂解液（阻断游离巯基）

稳定性数据：

4℃保存≤24小时（需添加蛋白酶抑制剂）

-80℃可保存2年（避免反复冻融）

特殊处理：

神经退行性疾病样本需避免反复冻融

外泌体样本需超速离心富集

优化操作步骤：

变性处理：含2%SDS的缓冲液95℃加热5分钟

加样策略：采用梯度稀释加样法

关键孵育：37℃恒温振荡（700rpm）80分钟

信号检测：电化学发光读数（积分时间400ms）

临床应用与科研价值

疾病诊断阈值：

神经退行性疾病：脑脊液>25 ng/mL与tau蛋白聚集正相关

肿瘤耐药监测：组织样本>50 ng/mL预示蛋白酶体抑制剂耐药

病毒感染：血清游离泛素>15 ng/mL提示病毒活跃

2025年研究前沿：

发现K63多聚泛素通过OPTN调控线粒体自噬

去泛素化酶抑制剂（VLX1570）进入II期临床

冷冻电镜解析26S蛋白酶体-泛素复合物结构

质量控制与问题处理

质控标准：

标准曲线要求：4参数拟合R2≥0.998

必检参数：

空白信号<500 RLU

质控品回收率93-107%

故障排除指南：

异常现象  根本原因  专业处理

信号饱和  样本未稀释  建议预实验确定稀释倍数

背景噪声  板条污染  使用无尘室环境操作

标准曲线异常  标准品降解  检查冷链运输记录

公司正在出售的产品：

常见问题与避坑指南：

环节   风险点   避坑建议

试剂使用   混用   严禁混用不同品牌或不同批号的试剂盒组分（如A品牌的包被板+B品牌的酶标二抗），这会导致反应体系崩溃。

终止反应   顺序   加入终止液后，溶液由蓝变黄。此时应尽快读数，因为颜色可能会随时间轻微变化。

保存   剩余板条   未用完的酶标板条，需立即密封，放入自封袋中并加干燥剂，保存于 2-8℃，避免受潮和反复冻融。

环境   污染   避免试剂接触漂白剂或含漂白剂的物质，它们会破坏酶的活性，导致实验失败。

建议： 

在购买前，务必查看说明书中的“交叉反应”列表和“样本类型”说明。如果说明书宣称特异性极高（如CR0.1%），

但在你的实际样本中出现了大量假阳性，那可能需要优化洗涤步骤，或者考虑更换抗体特异性更强的试剂盒。