欧洲棕色野兔综合症病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

欧洲棕色野兔综合症病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒用于检测欧洲棕色野兔综合症病毒（EBHSV）的RNA，采用染料法荧光定量RT-PCR技术，具有高灵敏度和特异性，适用于科研用途，不可用于临床诊断。

规格与组分

2×qRT-PCR缓冲液（棕色管，500 μL）

10×qRT-PCR酶混合液（红盖，100 μL）

ROX染料I（50×，棕色管，20 μL）

ROX染料II（50×，棕色管，20 μL）

荧光PCR专用模板稀释液（黄盖，1 mL）

EBHSV染料法qRT-PCR引物混合液（白盖，100 μL）

阳性对照（1×10^8拷贝/μL，黄盖，50 μL）

核酸释放剂（试用装，绿盖，20次/1 mL）

使用手册（1份）

运输与保存

低温运输，-20℃保存，有效期12个月。

阳性对照需单独存放，避免污染其他组分。

实验前准备

试剂处理：所有组分使用前需自然融化，混匀后短暂离心。

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行，避免交叉污染。

防护措施：使用一次性吸头、手套及专用工作服，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面及移液器。

操作步骤

反应体系配制（冰浴操作）：

10×PCR Buffer：5 μL

dNTP Mix（2 mM）：4 μL

引物1（10 pM）：2 μL

引物2（10 pM）：2 μL

Taq酶（2 U/μL）：1 μL

DNA模板（50 ng-1 μg/μL）：1 μL

加ddH2O至50 μL。

PCR程序设置：

预变性：93℃ 3-5分钟；

循环扩增（30-35次）：93℃ 40秒 → 58℃ 30秒 → 72℃ 60秒；

终延伸：72℃ 7分钟。

结果检测：取5-10 μL产物进行电泳分析，或保存于4℃/-20℃。

结果判读

阳性：Ct值<35，有明显指数增长曲线；

阴性：Ct值>38或无Ct值；

可疑（Ct值35-38）：需复检，重复结果仍在此范围且曲线呈S型则判为阳性。

注意事项

反应液需避光保存，避免气泡干扰。

严格分区操作，防止污染。

若需标准曲线，以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制，推算样本浓度。

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